B族维生素含量测定.docVIP

B族维生素的含量测定 B族维生素直接参与了氨基酸和细胞代谢，可以促进红细胞成熟，加强身体能量代谢，提高身体的反应能力和协调能力。而且B维生素又属于水溶性维生素，可以很简单地通过饮料的方式来补充，因此成为各种品牌的功能性饮料的主要添加剂。据有关市场调查发现，国产功能性饮料中添加的B族维生素几乎限于维生素B6、B12和烟酰胺3种，偶尔也有同时添加维生素B1的[1]。故饮料中B1、B6、B12 这三种维生素的含量测定对人们消费与使用饮料具有一定的安全和消费的指向性。 1、维生素B1 1.1在线荧光衍生一高效液相色谱法 陈晓春等使用高效液相色谱仪的在线衍生功能使食品中的维生素B转化为硫胺荧，再以荧光检测器检测其含量。在线衍生技术克服了离线手工衍生的偏差，与荧光检测器联用能有效提高检测的灵敏度，避免了国标方法中因正丁醇萃取不完全造成的待测物损失。本方法在精密度，准确度及检出限等各个方面都能满足日常饮料检测工作的需要[2]。 1.2酸性染料比色法 何树云等利用维生素B1与酸性染料溴麝香草酚蓝成盐，在420nm波长处测定吸收度。结果维生素B两点电位滴定法浓度在2.0—10.0ug／m1范围内与吸收度呈良好线性关系(r=O.998),平均回收率为99.8％,RSD=1.1％(n=4)；与重量法比较结果基本一致，且此法操作简使、快速[3]。 1.3两点电位滴定法 冯俊贤等提出了用两点电位滴定法测定维生素Bl含量的新方法。该法只需在滴定终点前附近记录两次AgN03标准溶液体积和相应的电极电位值，利用两点法公式计算滴定终点，从而确定维生索Bl含量[4]。 2、维生素B2 2.1高效液相色谱法 王浩等使用高效液相色谱法来测定维生素B6。色谱条件为C18(5μm,4.6mm×250mm i.d)反相色谱柱,流速1.0mL/min;柱温30℃;流动相:v(甲醇):v(0.2g/L辛烷磺酸钠,体积分数为0.25%的三乙胺溶液,用乙酸调pH3.2)=35:65;进样量50μL;激发波长310nm,发射波长395nm[5]。该法具有样品预处理简单、灵敏度高、分析时间短等优点,可用于功能性饮料中VB6的直接测定。 2．2高压液相色谱法(带荧光检测器) 何姗丽等使用高压液相色谱法[6]。饮料样品经稀释、过滤后, 用高压液相色谱仪进行测定。由于荧光检测器具有高选择性, 只对荧光物质或者当试样组分具有荧光性能时才有响应的特点, 能排除大部分其他物质的干扰。故该法测定饮料中维生素 B6含量具有方法灵敏度高, 测定结果准确可靠, 方法精密度高等特点。 2.3同步荧光法 徐烨等使用同步荧光法测定饮料中的维生素B6。实验条件：波长差为70 nm，扫描速度为150 nm／min，入射和出射狭缝宽度均为10nm，测定波长： B6为323nm[7]。同步荧光法具有灵敏度高、选择性好、散射光影响小等优点，非常适合于测定饮料中的维生素B6。 2.4微生物法 陈亚波等利用卡尔斯伯酵母茵(ATCC 9080)对维生素B6。以不同浓度标准溶液的吸光度相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，再根据标准曲线计算出试样中维生素B6的含量[8]。微生物法测定结果准确可靠、灵敏度好、精密度高，值得经常进行维生素检测的实验室应用推广。 3、维生素B12 3.1在线净化／固相萃取一高效液相色谱法 黄雄风等在双梯度HPLC系统上，以磷酸盐缓冲溶液一乙腈为流动相，将2.5 mL样品在线注入SPE柱(Acclaim PAII，3斗m，3．0nnn x 33mill)以富集维生素B12，通过改变流动相梯度在SPE柱上以正向淋洗方式预分离维生素B12被切入分析流路中的维生素Bl2在AcclaimPA11分析柱(3um，3.0mm x 150 mm)上以磷酸盐缓冲溶液一乙腈为流动相，0.5 mL／min流速梯度洗脱分离，使用紫外检测器在361 nm波长下检测，整个分析过程在20 min内完成[9]。该方法简单、快速、重现性好，相比于直接大体积进样和传统在线SPE模式，其去除杂质的效率更高、灵敏度更好，是一种测定饮料中微量维生素B12的简单、有效方法。 3.2微生物法 陈亚波等利用莱士曼氏乳酸杆菌(ATCC 7830)对维生素B12极高的灵敏性和特异性，以不同浓度标准溶液的吸光度相对于各浓度水平标准物质的浓度绘制标准曲线，定量计算出试样维生素B12含量[10]。林耀文等用缓冲溶液对样品进行处理,与戴氏乳杆菌共同培养后,使用紫外分光光度计于波长600nm处测定含乳饮料中维生素B12含量[11]。该方法具有简便、快速、灵敏度高,检出限低、重复性好等优点,是测定饮料中低水平维生素B12含量的有效方法。 3.3吖啶橙-罗丹明6G能量转移荧光猝灭法 在pH 5.0的Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液