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实验二 基础培养基、细菌接种与其常用生化反应
实验二基础培养基、细菌接种及其常用生化反应
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实验目的
了解细菌常用培养基
掌握细菌的分离培养技术及纯种移种法
熟悉细菌各种生长现象
熟悉细菌常用生化反应
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实验内容
操作 -- 细菌接种法
分离培养法——平板划线法(葡萄球菌/大肠埃希菌)
纯种培养法
斜面培养基接种法(葡萄球菌/大肠埃希菌)
半固体培养基接种法 --- 穿刺接种法(大肠埃希菌/痢疾杆菌)
液体培养基接种法 (葡萄球菌/大肠埃希菌/痢疾杆菌)
示教
细菌的生长现象
液体、固体、半固体培养基
常用生化反应
乳糖发酵试验
Indol试验
硫化氢试验
尿素分解试验
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细菌生长繁殖的条件
充足的营养物质
水,碳源,氮源,无机盐,生长因子
合适的外界环境
温度
酸碱度
气体
渗透压
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适合于细菌生长繁殖需要的各种营养物质及在PH(7.2~7.6)条件下配制而成的基质。
培养基配成后—〉灭菌
培养基
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培养基(按物理性状分类)
液体培养基
固体培养基: 2~3% of agar
平板:划线分离,菌落计数,分离纯化
斜面:纯种移种
半固体培养基: 0.1~0.5% of agar
观察穿刺线、保存菌种
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培养基(按营养组分及用途分类)
基础培养基:多数菌生长的基本营养成份
营养培养基:营养要求高的细菌生长。加入糖,血,血清,酵母浸膏等
血平板
合成培养基:研究细菌代谢过程。特殊菌的分离培养
鉴别培养基:含有特定的作用底物
糖发酵管,葡萄糖蛋白胨水
选择培养基:在培养基中加入抑制某菌生长的物质
肠道致病菌选择培养基:SS培养基,抗生素培养基
厌氧培养基
庖肉培养基
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平板划线法
注意事项
不要说话,严格无菌操作
灼烧后接种环要冷却
划线时用腕力,不要使接种环嵌入琼脂
各个分区要分明
在培养皿底部贴标签
倒置培养――防止细菌被冲散
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斜面接种法
(1)用左手握住菌种管和斜面培养基管,右手持接种环或接种针。
(2)用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。
(3)用接种环或接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。
(4)伸入斜面培养管内,先从斜面底部到顶端拖一条接种线,再自下而上蜿蜒划线。
(5)接种完成之后,用火焰灭菌培养管口,并塞上棉塞,置于37℃培养。
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半固体培养基接种法
(1)用左手握住菌种管和半固体培养管,右手持接种针
(2)用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞,将管口通过火焰灭菌。
(3)用接种针伸入菌种管内,挑取用来接种的菌苔。
(4)垂直刺入半固体中心,至近管底部,然后沿穿刺线退出。
(5)塞回棉塞,接种针重新灭菌。接种完毕,于37℃培养18—24h,观察生长情况。
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液体培养基接种法
(1)用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。 (2)在试管内壁与液面交界处轻轻研磨,使细菌均匀得散落在液体培养基中。
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