纳米复合羟基磷灰石（nHA）根管充填材料的应用基础研究.doc

　　纳米复合羟基磷灰石（nHA）根管充填材料的应用基础研究 【摘要】 　　目的 通过对纳米羟基磷灰石复合根充材料与传统根管充填材料（充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合制剂）进行细胞毒性、根管密合性及抑菌性的对比研究，评价纳米羟基磷灰石复合材料的细胞毒性、根管壁密合度以及抑菌作用。材料与方法 细胞毒性实验：体外培养成骨细胞，添加纳米羟基磷灰石复合材料浸提液，并以培养液为阴性对照组，充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合糊剂为阳性对照组。根据ISO标准采用MTT法进行体外细胞毒实验，测试不同浸提时间的材料浸提液与成骨细胞接触1、3、5、7天的吸光度值,以评价其细胞毒性。根管密合性实验：将10颗近期拔除的单根牙随机分成2组，每组牙齿按常规方法进行根管预备。实验组为40%纳米羟基磷灰石复合糊剂充填，对照组为充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合糊剂充填。拍X线片以保证各组中实验离体牙牙根均完善充填，充分硬固后，进行微渗漏试验。改良葡萄糖检测微渗漏分析装置进行根管密合度实验，30天后结果由葡萄糖定量分析仪测定。抑菌性实验：将蘸有营养肉汤培养液的棉拭子反复擦感染根管，进行细菌接种、分离、鉴别、培养。培养结果为变型链球菌、金黄色葡萄球菌二种可利用菌种，分别用血培养基、普通培养基分别培养，对实验组与对照组充填材料进行抑菌性实验，观察抑菌环大小，检测出每组药物的抑菌环直径，取平均值 计算 。结果 细胞毒性实验：实验组与阴性对照组无显著差异（P＞0.05），实验组与阳性对照组有显著差异（P＜0.05）。根管密合性试验：对照组葡萄糖浓度明显高于实验组，有显著性差异（P＜0.05）。抑菌性实验：各组根充糊剂均有良好抑菌性，实验组与对照组统计学差异不显著（P＞0.05）。结论 纳米羟基磷灰石根充材料体外细胞毒性实验阴性，有良好的生物相容性。纳米羟基磷灰石复合根充材料其与根管壁密合度方面明显优于充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合糊剂，并具有良好的抑菌性。 【关键词】 纳米羟基磷灰石 根管充填 细胞毒性 微渗漏 抑菌性 　　根管 治疗 术 发展 的总趋势之一是研究无致癌倾向的、能够严密堵塞根管的充填材料。本研究寻找一种新型的根管充填材料，有助于提高根管治疗术的疗效，更好地服务于口腔临床。 　　 1 材料和方法 　　1.1 实验器材 纳米羟基磷灰石，由南京爱普瑞纳米材料有限公司；碘仿，哈尔滨市东北齿科材料加工厂；聚乙烯醇，国药集团化学试剂有限公司；充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合制剂，上海二医张江生物材料有限公司；MTT，美国GIBCO公司；二甲基亚砜，美国GIBCO公司；胎小牛血清，美国Sigma公司；DMEM培养液，美国Gibco公司；SD大鼠，浙江大学生物实验中心。裂钻、根管扩大针，登士柏牙科有限公司；肉汤培养基、厌氧培养基（GAM）、需氧培养基（BA）、厌养罐、微量生化管，明新生物技术研究所；BioRADModel-550酶联免疫酶标仪，美国Sigma公司；二氧化碳培养箱，美国热电集团；Olympus IX-70倒置相差显微镜，日本OLYMPUS公司；超净工作台VS-1300-U，苏州安泰空气技术有限公司；S2309A型牙科椅，西北医疗器械（集团）有限公司；ELITYS数字X光牙片机，上海复星医疗器械有限公司；广口瓶、粘蜡、1mol/L无菌葡萄糖溶液、2ml／瓶无菌蒸馏水装置、改良葡萄糖滴定微渗漏仪，佳木斯大学附属口腔 医院 。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 细胞毒性实验 　　1.2.1.1 材料浸渍液的制备 采用DMEM培养液配制纳米羟基磷灰石根充糊剂浸提液。称取20纳米羟基磷灰石0.5g经高压灭菌后加入DMEM培养液10ml。振荡混匀后在CO2细胞培养箱中37℃放置3d，3000r/min离心5min后取上清液，经滤过除菌，放入4℃冰箱保存。实验共分3组：实验组为20纳米羟基磷灰石浸提液，DMEM培养液为阴性对照组，0.05g/ml新调制的充填用复方麝香草酚散甲醛甲酚复合制剂浸提液为阳性对照组。观察成骨细胞在不同培养液中的生长繁殖情况。 　　1.2.1.2 实验动物与成骨细胞培养 新生3～5d SD大鼠，体重4～6g。在无菌条件下处死，75%乙醇中浸泡5min，无菌条件下取颅顶骨，放大镜下彻底去净附属组织，剪成1mm3小片，D-Hank,s液洗涤3次, 用0.25%胰蛋白酶在37℃消化30min，然后移入0.1%胶原酶溶液中，37℃下震荡消化60min，将含细胞的消化液在1500r/min下离心2次，每次5min沉淀物用DMEM培养液制成细胞悬浊液，将细胞悬浊液按5×104/ml接种于96孔培养板加入DMEM培养液在37℃、饱和湿度,5%CO2和95%空气孵箱内进行培养，培养液中加入含有20%胎牛血清，待培养至70%～90%贴壁，细胞生长良好