分子诊断学复杂性疾病的分子诊断.pptVIP

肿瘤的发病机制 阶梯式遗传学疾病 表观遗传学改变 Classical genetics 表观遗传学 研究不涉及DNA序列改变的基因表达和调控的可遗传变化的，或者说是研究从基因演绎为表型的过程和机制的一门新兴的遗传学分支。 表观遗传 所谓表观遗传就是不基于DNA差异的核酸遗传。即细胞分裂过程中，DNA 序列不变的前提下，全基因组的基因表达调控所决定的表型遗传，涉及染色质重编程、整体的基因表达调控（如隔离子，增强子，弱化子，DNA甲基化，组蛋白修饰等功能 ), 及基因型对表型的决定作用。 表观遗传学的研究内容： 基因转录后的调控 基因组中非编码RNA 微小RNA（miRNA） 反义RNA 内含子、核糖开关等 基因选择性转录表达的调控 DNA甲基化 基因印迹 组蛋白共价修饰 染色质重塑 组蛋白修饰 2 染色质重塑 3 RNA 调 控 4 DNA 甲基化 1 DNA甲基化(methylation) DNA甲基化一般与基因的沉默(gene silence)相关，非甲基化(non-methylation)一般则与基因的活化(gene activation)相关，而去甲基化(demethylation)往往是与一个沉默基因的重新激活(reactivation)相关 DNA甲基化对维持染色体的结构具有重要作用，并且与X染色体的失活、基因印迹和肿瘤的发生密切相关。 基因变异 基因异常表达 肿瘤 因此可以将特定肿瘤的基因表达标记，应用到肿瘤诊断、分型和对治疗反应性的预测当中。 癌基因（oncogene）：能引起细胞恶性转化的基因 原癌基因（pro-oncogene）或细胞癌基因（c-onc） 按照癌基因编码蛋白的结构和功能及其在细胞内的定位，癌基因可以分为五大类： 生长因子类 酪氨酸激酶类 GTP结合蛋白类 核蛋白类 端粒酶（telomerase）P264 癌基因的活化机制： 转导：漫长的生物进化过程中，正常基因整合癌基因 点突变 插入突变 易位 基因扩增 基因甲基化改变 抑癌基因： 一对等位基因由于其功能的丧失，从而使细胞过度生长增殖，导致肿瘤形成。这一对等位基因即为抑癌基因。 主要包括两个方面： 抑癌基因必须是一对等位基因同时是失活的； wild-type导入到肿瘤细胞，体外培养可以抑制细胞增殖 常见的抑癌基因： Rb基因、p53基因、APC基因、BRCA1基因、WT1基因、erbA基因、INK4基因、p21clip1基因 基因变异 DNA损伤及其分子改变 基因组不稳定性 染色体异常 微卫星不稳定性 肿瘤早期分子诊断及预后 肿瘤早期诊断的策略： 考虑因素： 特殊类型肿瘤的靶基因； 不同肿瘤特定靶基因的突变谱； 共检测使用的合适样本； 分子诊断技术的敏感性 检测标本的选择：多选择含有患者肿瘤细胞来源基因信息的体液、分泌物或排泄物作为临床肿瘤分子诊断的检测样本，如血、痰及大便等 检测样本的处理： 重复离心法：EDTA抗凝血→4 ℃1500r/min centrifuge 20min →上层血浆3000r/min centrifuge 10min，吸取上清，弃去沉淀，得到的液体即为无细胞血浆，置-70 ℃保存备用 蛋白酶K-酚/氯仿抽提法 磁珠法 QIAamp DNA mini kit(超链接) 肺癌的早期分子检测： 甲基化特异性引物基因扩增（methylation specific PCR, MSP）、甲基化特异性序列分析（methylation specific sequencing, MSS） Section 3 原发性高血压 Chengdu Medical College  Chapter 16 遗传性疾病的分子诊断 Molecular pathology represents the application of the principles of basic molecular biology to the investigation of human disease processes. molecular pathology：分子病理学 Key Points Gene mutation and/or genetic polymorphism is a normal occurrence, usually without grave consequences, that contributes to those traits that establish our individuality. genetic polymorphism：基因多态性 According to numerous information avail