实验四 总氮量测定——凯氏定氮法.pptVIP

实验四 总氮量的测定——凯氏定氮法;目的和要求;实验原理;消化完了后，在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液，使硫酸铵分解，放出氨。用水蒸汽蒸馏法，将氨蒸入过量标准无机酸溶液中，然后用标准碱溶液进行滴定，准确测定氨量，从而折算出含氮量。 以甘氨酸为例，该过程的化学反应如下： ;测定时常用硼酸溶液收集氨，氨与溶液中的氢离子结全，生成铵离子，使溶液中氢离子浓离降低。然后再用强酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止。所用的强酸的当量数即相当于被测样品中氨的当量数。 本法适用的范围为0.2-1.0mg氮。相对误差应小于±2%。 ;试剂;主要仪器：;实验流程;实验流程;消化时先以小火缓慢加热，待内容物完全炭化、泡沫消失后，加大火力保持瓶内液体微沸，消化至溶液呈蓝绿色透明后，再继续加热微沸0.5h，取下冷却，小心加入20mL水，移入100mL容量瓶中，用少量水洗定氮瓶，并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。;蒸馏、吸收;滴定;结果计算;若样品中除有蛋白质外，尚有其他含氮物质，则样品蛋白质含量的测定要复杂一些。首先，需向样品中加氯乙酸，使其最终浓度为5%，然后测验定未加三氯乙酸的样品及加入三氯乙酸后样品的上清液中的含量氮量，得出非蛋白氮量及总氮量，从而计算出蛋白氮，再进一步折算出蛋白质含量。 蛋白氮=总氮-非蛋白氮 蛋白质含量（克/%）=蛋白氮×6.25;注意：;蛋白质是一类复杂的含氮化合物，其中每一种蛋白质都有恒定的含氮量，一般大约为14-18%，平均为16%。由凯氏定氮法测出含氮量，再乘以系数6.25（即每含氮1g，就表示该物质含蛋白质6.25g）即为蛋白质量。 最好将三氯乙酸沉淀的蛋白质部分再去消化，消化后测含氮量，这个含氮量应相等于由总氮及非蛋白氮计算的蛋白氮量。但操作麻烦一些。