HPV16E6和E7蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义.pdfVIP

广东医学 2013年8月第 34卷第 16期 GuangdongMedicalJournalAug．2013，Vo1．34，No．16 · 2537 · HPV16E6和 E7蛋 白在非小细胞肺癌中的 表达及意义术 李维山 ，张延新 ，杜华贞 ，宋文刚 ，赵琰 ，郭宝强。 漯河医学高等专科学校病理教研室 (河南漯河 462000)； 漯河 医学高等专科学校第一附属 医院病理科 (河南漯河 462002)；河南省临颍县人民医院病理科 (462600) 摘【要】 目的 研究漯河周边地区HPV16DNA阳性的非小细胞肺癌(NSCLC)病变组织中E6、E7蛋白表达 情况及与临床病理参数之间的关系，探讨HPV16E6和E7蛋 白在 NSCLC发病机制中的作用。方法 以核酸分子 快速导流杂交基因芯片技术(HybrMax)检测证实的HPV16DNA阳性的52例新鲜NSCLC和 40例癌周肺组织为 研究对象，采用Westernblot方法检测HPV16E6和E7蛋 白的表达。结果 HPV16DNA阳性 NSCLC组织中， HPV16E6、E7、E6／E7蛋 白的表达率分别为48．1％、51．9％、44．2％；40例癌周肺组织中，HPV16E6、E7、E6／E7蛋 白表达阳性率分别为20．0％、15．0％、29．3％。HPV16DNA阳性NSCLC组织中E6、E7和E6／E7蛋 白共表达阳性 率均高于癌周肺组织(P0．05)，与患者年龄、性别以及肿瘤组织学类型无关 (P0．05)，但与肿瘤分化以及淋巴 结转移有关(P0．05)。结论 HPV16E6和E7蛋白在NSCLC发生发展 中具有重要作用，并可能参与NSCLC的 淋 巴道转移 。 【关键词】 非小细胞肺癌；HPV16；E6蛋白；E7蛋 白；核酸分子快速导流杂交基因芯片技术；Westernblot 肺癌是人类常见的恶性肿瘤之一，对人类健康危 核酸分子杂交仪均购 自潮州凯普生物科技有限公司。 害极大 ，主要分为小细胞肺癌 (smal1celllungcarcino— 脱氧胆酸、苯甲基磺酰氟、亮抑酶肽、抑肽酶、N，N，N， ma)和非小细胞肺癌 (nonsmallcelllungcarcinoma， N 一四甲基 乙二胺均购 自Sigma公 司，小鼠抗 大 鼠 NSCLC)，后者 占所有肺癌 的80％。尽管 已经明确吸 Ve 抗体、B—actin抗体购 自Santacruz公司，HPV16 烟、大气污染等是肺癌发生的重要危险因素，但是确切 E6、E7抗体购 自北京博奥森 ，二抗试剂盒、ECL试剂盒 病因仍然不清楚，近年来研究表 明，人乳头状瘤病毒 购 自北京中山生物公司。 (HPV)、Merkel细胞多瘤病毒的感染与肺癌的发生发 1．3 方法 展可能都有密切关系…，但 HPV在 NSCLC中的感染 1．3．1 HybrMax 技术进行 HPV分型检测 提取新 报道差异较大，目前认为可能是因为不同的地域以及 鲜NSCLC组织及肺癌周边正常肺组织 HPVDNA后， 不同的检测方法所致…，我们采用核酸分子快速导流 进行 PCR扩增，随后采用 HybrMax 医用核酸分子杂 杂交基因芯片技术 (HybrMax)以及 Westemblot法检 交仪进行核酸分子快速导流杂交，最后进行酶标显色。 测NSCLC中HPV16DNA以及 HPV16E6及 E7蛋 白的 结果分析判断：根据芯片上 HPV基因亚型分布的相应 表达 ，初步了解漯河周边地 区NSCLC中HPV16DNA 着色位点判断为何种基因型 。基因型包括 13种高 感染情况，并探讨 HPV16E6及 E7蛋 白的表达在 危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、 NSCLC发生中的作用及与病理临床参数之间的关系。 68)和5种低危型HPV(6、11、42、43和44)和3种中国 人常见的基 因型 HPV(53、56和 CP8304)，最后选取 1 资料与方法 HPV16DNA阳性的NSCLC组织52例 (NSCLC组)，选 1．1 标本来源 收集2010年