HLA-A2复合物与抗转铁蛋白受体单链抗体融合蛋白的构建、表达及鉴定.pdfVIP

第 39卷第 6期第810页 华中科技大学学报 (医学版) Vo1．39 No．6 P．810 2010年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2O10 病毒肽 ／HLA—A2复合物与抗转铁蛋白受体单链 抗体融合蛋 白的构建、表达及鉴定* 李佳楠 ， 孙 伟。， 吴雄文。△ ‘江汉大学生命科学学院生物技术系，武汉 430056 华 中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系，武汉 430030 摘要：目的 制备抗转铁蛋 白受体单链抗体与病毒肽 ／HLA_A2的融合蛋 白。方法 利用重组 DNA技术将 HLA— A2基因和转铁蛋 白受体单链抗体 (TfRscFv)基因，用柔性的 linker(Gly-4一Set)s连接并克隆到原核表达载体 pET28a (+)上，转化大肠埃希菌BL21(XDE3)菌株，获取重组子 ，经 IPTG诱导表达 目的蛋 白。将纯化的 目的蛋 白和Bz微球蛋 白(Bm)与HLA—A2限制性的乙肝病毒(HBV)核心抗原肽HBcAgs-z7在体外进行稀释复性，形成 HBcAg ／HLA-A2／ TfRscFv融合蛋 白。利用ELISA和微球结合试验检测融合蛋 白的空间构象 。结果 构建的融合蛋 白基因具有正确的 序列，经 IPTG诱导后以包涵体形式表达的蛋白分子量正确，体外稀释复性后的融合蛋白具有正确的HLA—A2空间构 象。结论 成功构建了HBcAg。 ／HLA—A2／TfRscFv融合蛋 白，为进一步将该融合蛋 白通过其单链抗体加载到肿瘤细 胞表面从而诱导乙肝病毒肽特异性细胞毒性T淋巴细胞杀伤肿瘤细胞奠定了物质基础。 关键词：HLA-A2； 转铁蛋白受体； 单链抗体 中图分类号 ：R349．6 DOI：10．3870／j．issn．167240741．2010．06．O18 Construction，ExpressionandIdentificationoftheFusionProteinofPeptide／HLA—A2 ComplexandTransferrin ReceptorSingleChainAntibody IAJia’nan ，SunWei，WuXiongwen△ DepartmentofBiotechnology，LifeScienceCollege，JianghanUniversity，Wuhan430056，China DepartmentofImmunology，SchoolofBasicMedicalSciences，TongjiMedicalCollege。Huazhong UniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China Abstract Objective Toprepareafusionproteinofsinglechainantibodyoftransferrinreceptorwithpeptide／HLA—A2 complex．Methods AhybridgeneencodingHLA-A2／TfRscFvfusionmoleculewasconstructedbyligationofsequencescoding fortheextracellularpartofHLA_A2heavychainwiththatfortheTfRscFv，andthehybridgenewasrecombinedintopET28a (+)togeneratepET28a(+)+ (HLA—A2／TfRscFv)recombinantplasmid．Uponinductionwithisopropyl[3-D-thiogalactoside (IPTG)，thefusionmoleculewasexpressedinE．coliBL21cells，andlargeamountsofrecombinan