IGF-1R信号通路及上皮-间质转化对非小细胞肺癌A549细胞EGFR-TKIs获得性耐药的作用.pdfVIP

广东医学 2014年5月 第35卷第 10期 GuangdongMedicalJourn~ May．2014，Vo1．35，No．10 · 1473 · IGF一1R信号通路及上皮 一问质转化对非小细胞 肺癌 A549细胞EGFR—TKIs获得性耐药的作用：l= 张曦 ，张为民 ，陈蓓 ，曾云云 南‘方医科大学研究生学院(广州510515)；广州军区广州总医院肿瘤科(广州510010) 【摘要】 目的 探讨胰岛素样生长因子 I型受体(IGF一1R)信号通路及上皮一间质转化(EMT)对EGFR野 生型、K—ras突变型非小细胞肺癌A549细胞表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂 (EGFR—TKIs)获得性耐药的作用。 方法 选用EGFR野生型、K—ras突变型的非小细胞肺癌A549细胞，用吉非替尼将其诱导成耐药细胞 A549／GR。 M1Tr法检测细胞增殖，3t,J痕实验及 Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力，qRT—PCR和Westernblot法分别 检测EMT标志分子及 IGF一1R信号通路相关分子的mRNA和蛋白表达。结果 A549／GR对吉非替尼的敏感性 显著下降(P0．05)。与A549细胞比较，A549／GR细胞形态呈现间质化改变，侵袭和转移能力均显著增加 (P 0．05)。A549／GR细胞 中间质标志Vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增多(P0．05)，上皮标志E—Cadhefin 表达量显著减少(P0．05)。与A549细胞相比，A549／GR细胞 IGF一1R的mRNA和蛋 白及其磷酸化表达量均未 见明显改变(P0．05)，而AKT磷酸化水平及其mRNA水平明显上调 (P0．05)，ERK蛋白及其磷酸化和mRNA 表达量均明显增加 (P0．05)。A549／GR细胞的 EGFR及其磷酸化蛋 白表达量较 A549细胞明显下降(P 0．05)。结论 EMT及AKT和 ERK信号通路的激活均可能在 EGFR野生型、K—ras突变型A549细胞的EGFR— TKIs获得性耐药中起重要作用，但获得性耐药与 IGF一1R表达无关。 【关键词】 非小细胞肺癌；表皮生长因子受体一酪氨酸激酶抑制剂；获得性耐药；上皮一间质转化；胰岛素 样生长 因子 I型受体 RolesofIGF——1R signalpathwayandepithelial——mesenchymaltransitioninacquiredresistanceofEGFR —-TKIs innon—smalllungcancerA549cells． ZHANGXi ，ZHANG Wei—min，CHEN Bei，ZENG Yun—yun． Graduate College，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou510515，China Correspondingauthor：ZHANG We—min．E—mail：wmzhang79@ 126．con 【Abstract】 Objective Toinvestigatetherolesofinsulin—likegrowthfactorIreceptor(IGF一1R)signalpath— wayandepithelial—mesenchymaltransition(EMT)intheacquiredresistanceofepidermalgrowthfactorreceptor—tyro— sinekinaseinhibitors(EGFR—TKIs)inEGFRwild—typeandK—rasmutantnon—smallcelllungcancer(NSCLC) A549cells．M ethods TheEGFRwild—typeandK—rasmutanthumanNSCLCA549cellswereusedinthisstudy．The gefitinib—resistantA549cells(namedasA549／GRcells)werecreatedbyrepeatedexposuretogefitinib．MrITassaywas usedtomeasurethecellproliferation．Wound—healingarrayandtranswellarraywereusedtodeterminetheinvasiveand mirgatorycapabilitiesofcells．ThegeneandproteinexpressionsofE —cadhefin，vimentin，