IRAK-4基因沉默对人成骨样细胞凋亡的影响.pdfVIP

第 34卷 第 5期 中山大学学报(医学科学版) Vo1．34 No．5 2013年 9月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Sep． 2013 IRAK一4基因沉默对人成骨样细胞凋亡的影响 杨子波，傅 明，张紫机，黄保丁，张志奇 ，廖威明 (中山大学附属第一医院关节外科，广东广州 510080) 摘 要：【目的】研究 siRNA沉默白细胞介素一1受体相关激酶一4(IRAK一4)基因对人成骨样细胞株MG63凋亡及凋亡相 关基因Bcl一2、Bax表达的影响。 【方法】以Lipofectamine2000为载体将IRAK一4一siRNA转染入MG63细胞(CON组：不加入 任何转染试剂 ；sc组：以scrambledsiRNA序列进行转染 ；KD组：以特异性IRAK一4一siRNA序列进行转染)，应用流式细胞术 及TUNEL法检测细胞凋亡水平，westernblotting检测Bcl一2、Bax基因的表达。 【结果】与对照组相比，靶基因沉默组(KD 组)细胞的IRAK一4mRNA及蛋白表达水平显著降低；转染 48h后 ，KD组细胞增殖变缓 ，凋亡增加 ，Bcl一2蛋白的表达明显 下调且 Bc1—2／BaxSCBcl一2／BaxKD：Spearman等级相关分析显示MG63细胞凋亡比例与Bcl一2／Bax的比值间有显著的相 关性。 【结论】siRNA沉默IRAK一4基因能够诱导人成骨样细胞株MG63凋亡，且靶细胞凋亡水平与Bcl一2、Bax基因表达 水平的比值相关。 关键词：人成骨样细胞；IRAK一4；细胞凋亡；RNA干扰；基因沉默 中图分类号 ：R392．11；R687．4 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3554(2013)05—0672—09 EffectsofIRAK-4GeneSilencingonApoptosisinHumanOsteoblast-likeCell YANGZi—bo，FUMing，ZHANGZi—ji，HUANGBao—ding，ZHANGZhi—qi，LIAOWei—ming (DepartmentofOrthopedicJointSurgery，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China) Abstract：O【bjective】ToexploretheeffectsofsiRNA—inducedinterleukin一1receptor—associatedkinase一4 (IRAK一4) gene silenceonapoptosisofMG63cellsandtheexpressionlevelsofrelatedgenesBcl一2andBax． M【ethods】Thegenetransfection (controlgroup=MG63cells；SCgroup=MG63cellstransfeetedwithscrambledIRAK一4siRNA；KDgroup=MG63cellstransfected withIRAK一4一specificsiRNA)wasperfomredusingLipofectamine2000．TheapoptosisofMG63cellsweretestedbyFCMandterminal deoxynucleotidy1transferasedUTPnickendlabeling(TUNEL)methods．TheproteinlevelofBcl一2andBaxweredetectedbyWestern blotting．R【esult】TheexpressionofIRAK4·mRNAandproteinintheKDgroupweresignificantlydecreasedcomparedwithothertwo groups．Comparedwiththecontrolgroups，48hoursafterthetransfection，IRAK一4genesilencinginMG63cellscausedmorphologi