IRE1-XBP1通路调控肝巨噬细胞极性的机制研究.pdfVIP

2314 重庆医学 2016年 6月第45卷第 17期 · 论 著 · d0i：10．3969／j．issn．1671—8348．2016．17．004 IRE1一XBP1通路调控肝巨噬细胞极性的机制研究 胡大仁 ，程 黎 ，刘 燕 ，刘一呜。，李金政 ，龚建平 ，苟剑林 (1．重庆三峡 中心医院肝胆外科，重庆万州 404000；2．重庆医科大学附属第二医院肝胆外科 400010) [摘要] 目的 分离、培养 LEWIS大鼠肝脏肝巨噬细胞(KCs)，观察肌醇酶 1一x盒连接蛋 白1(IRE1一XBP1)通路活性改变对 KCs功能的调控的作用机制。方法 (1)采取Ⅳ型胶原酶消化肝脏联合非连续梯度离心法分离 Lewis大 鼠KCs；(2)鉴定后 的 KCs分为4组 ：XBP1沉默组(XBP1一shRNA组)、错义序列沉默对照组(Ctrl-shRNA组)；Adr-XBP1过表达组(AdV—XBP1组)、错 义序列过表达对照组(Ctri—AdV组)；(3)实时荧光定量 PCR(RT—PCR)检测各组 KCs中XBP1、IL-6、IFN一、TNF_q、IL一17转录水 平；蛋 白免疫印迹法(westernblot)检测JAK1、JAK2、STAT1及 sTAT3的蛋 白表达水平；(4)流式细胞术(FCM)及激光共聚焦检 测各组Kcs表型的变化情况；(5)分离大鼠脾脏淋巴细胞，尼龙毛柱过滤纯化T细胞 ，与上述各组KCs共培养，Brdu渗入法检测 T细胞增殖情况；(6)AnnexinV／PI法FCM观察T淋巴细胞凋亡情况；(7)酶联免疫吸附测定(ELISA)检测上清液 中IL_6、IFN一 7、TNF—a、IL厂17及 IL一1O水平。结果 (1)RT—PCR结果显示，XBP1一shRNA组中XBP1的表达量较对照组显著降低，而在Adv— XBP1组则 明显上调(P0．05)；(2)FCM 发现 ，XBP1一shRNA组 中MHc_Ⅱ、CD86、CD4O的表达明显低于对照组，而 CD204和 CD206的表达则显著高于对照组 ；而在 Adv—XBP1组，则呈相反趋势；(3)Westernblot检测发现 XBP1一shRNA组 中JAK1、JAK2、 sTAT1和 STAT3的蛋 白表达及其磷酸化水平均受到抑制，而在 Adv_XBP1组则上述蛋 白的表达及磷酸化水平得到显著增强； (4)Brdu发现抑制 KCs中IRE1一XBP1活性后T细胞增殖受到明显抑制 ，凋亡增加 ，促炎细胞 因子分泌减少，抗炎细胞 因子分泌增 加 (PG0．05)，而上调 KCs中 IREl-XBP1活性后 T细胞增殖则明显增强，凋亡 明显减少，促炎细胞 因子分泌增加，抗炎细胞 因子 分泌减少(PG0．05)。结论 KCs中IRE1一XBP1通路活性变化可以转化 Kcs的极性状态，并通过调节JAK—sTAT家族成员表 达，调控 KCs自分泌细胞因子的组成成分；KCs中IRE1一XBP1通路活性变化可以影响共培养初始T淋巴细胞的增殖分化、凋亡 及相 关细胞 因子的分泌 。 [关键词] X盒结合蛋 白1；肝巨噬细胞；极性调节 [中图分类号] R392．4 [文献标识码] A [文章编号] 1671—8348(2016)17—231405 TheeffectofIRE1一XBP1pathwayonregulation ofpolarizationinactivatedKupffercells H Daren ，ChengLi，LiuYan ，LiuYiming ，LiJinzheng ，GongJianping ，GouJianlin (1．DepartmentofHepatobiliarySurgery，ChongqingThreeGorgesCentralHospital，Wanzhou，Chongqing404000，China； 2．DepartmentofHepatobiliarySurgery，theSecondA{{tliatedHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400010，China) [Abstract] Objective T