Mistic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在大肠埃希菌中高效表达.pdfVIP

219O 重庆医学 2016年 6月第45卷第 16期 论著 ·基础研究 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2016．16．010 Mistic融合蛋 白促进 ∞一3脂肪酸去饱和酶 Fat一1 在大肠埃希菌中高效表达 赵 艳 ，柳欣欣 ，王大新 ，李湘呜。，陈 平。，王 昊 (1．扬州1大学临床 医学院江苏省苏北人 民医院医学实验研究 中心 ，江苏扬州 225001；2．扬州大学 临床 医学院江苏省苏北人 民医院普外科，江苏扬州 225001；3．扬州大学医学院，江苏扬州 225001) p [摘要] 目的 构建真核膜蛋 白00-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希茵中的高效表达质粒。方法 利用分子克隆技 术构建携带 Fat-1基 因的重组原核表达质粒 pET32a-Fat-1和插入膜蛋 白表达分子伴侣 Mistic基 因的pET32a-Mistic—Fat-I；将两 种重组质粒转化大肠埃希茵株 BL21(DE3)，IPTG诱导表达 Fat一1蛋 白和 M110-Fat-1蛋 白，通过十二烷基一聚丙烯酰胺凝胶 电泳 (SDS)灰度分析其表达量，蛋 白免疫印迹法(Westernblot)进一步鉴定蛋 白表达 。结果 经酶切鉴定和测序证 实成功构建 r 了pET32a—Fat-I和 pET32a—Mistic—Fat一1原核表达载体 ；SDS和 Westernblot证实∞一3脂肪酸去饱和酶 Fat一1在原核表达 系统中没有明显诱导表达，而M110一Fat一1融合蛋 白在大肠埃希菌中获得 了高效表达，占全细胞蛋 白总量的 15 。结论 co-3脂 f 肪酸去饱和酶 Fat-1基 因与 Mistic基 因融合表达 ，实现 了在原核宿主 中高效表达真核膜整合蛋 白co-3脂肪酸去饱和酶 Fat一1。 [关键词] Mistic；∞一3脂肪酸去饱和酶 Fat-1基 因；膜蛋 白；高效表达 P [中图分类号] R34 [文献标识码] A [文章编号] Fusion toM isticimproved fattyaciddesaturaseFat-1overexpression in E．coli ZhaoYan ，LiuXinxin ，Wang Daxin ，LiXiangming。，ChenPing。，Wang Hao e (1．MedicalResearchCenter，NorthernJiangsuPeoplesHospitalClinicalCollegeofYangzhouUniversity，Yangzhou， l Jiangsu225001，China；2．DepartmentofGeneralSurgery，NorthernJiangsuPeoplesHospitalClinicalCollegeofYangzhou University，Yangzhou，Jiangsu225001，China；3．M edicalCollege，YangzhouUniversity，Yangzhou，Jiangsu225001，China) o [Abstract] Objective ToconstructahighlyefficientexpressionplasmidofeukaryoticnuclearmembraneproteinOmega3 fattyaciddesaturasegeneFat-1inE．coli．M ethods Usingmolecularcloningtechnolog