测定吸光度.PPT

第33、34课时 教学内容 第33,34学时教学内容 教学要求 教学重点及难点 §9.2 光度计及其基本部件 2. 分光光度法 9.2.1 基本组成 9.2.2 主要部件 2. 单色器 光栅：光的衍射和干涉原理 3.吸收池 4. 检测系统 (2)光电二极管阵列 9.3.2 显色剂 4.干扰的消除 9.3.3 三元配合物在光度分析中的应用简介 §9.4 吸光度测量条件的选择 课后作业 本节课程到此已全部结束！ 9.4.3 吸光度读数范围的选择 在用分光光度计测定时，一定要使测定的吸光度处于一个适宜的范围之内，在不同的吸光度范围读数会带来不同程度的误差，在什么范围内读数误差最小？ 朗伯—比耳定律： A = - lgT = - 0.434lnT = κbc 将①微分： ① ② * 教学要求　 教学重点 　 教学难点 　 课后作业 　 titrimetric analysis §9.2 光度计及其基本部件 §9.3 显色反应与条件的选择 §9.4 吸光度测量条件的选择 一　掌握光度计及其基本部件。 二　掌握吸光度测量条件的选择方法 教学重点： 教学难点 ： 吸光度测量条件的选择方法 吸光度测量条件的选择 参比溶液的选择方法 参比溶液的选择 问题：1.郎伯-比尔定律的物理意义？ 2.简述标准曲线法测量步骤。 当一束平行单色光通过均匀、非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光光度与吸光物质的浓度及吸收层厚度成正比。 选取与被测物质相同的标准样品，配制成一系列浓度不同的标准溶液，按样品的测定方法显色后，在选定的测量波长下（通常为λmax ）分别测定吸光度，绘制浓度—吸光度曲线，得到一条过原点的曲线（标准曲线）。将样品配制成一定体积的溶液，按同样的方法显色，测定吸光度，查标准曲线，即可得到样品的含量。 1.目视比色法 用眼睛观察、比较溶液颜色的深浅以确定物质含量的方法。 标准系列法： 1 2 4 8 16 32 x 优点：1.仪器简单、操作简便、适合大批量分析。 2.比色管液层较厚，灵敏度较高（ppm）。 3.不符合郎伯-比尔定律，仍可采用。 缺点：1.准确度差，相对误差为5%～20%。 2.标准系列不能放置，要临用时新配制。 以郎伯-比尔定律为理论基础的仪器分析方法，使用仪器代替人的眼睛测量物质对光的吸收，灵敏度和准确度都有很大的提高。 区别：分光光度法测量物质对光的吸收。 目视比色法比较物质透过光的强度。 特点： 1.入射光为近似单色光，基本不偏离郎伯-比尔定律，准确度高，相对误差为2 %～ 5 %。 2.通过选择入射光和参比溶液，可消除干扰，提高选择性。 3.利用吸光度的加和性，可同时测量多种组分。 各种分光光度计 （动画） 光源 单色器 样品室 检测器 显示 §9.2 光度计及其基本部件 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。 1. 光源 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ③色散元件：将复合光分解成单色光 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任意波长单色光的光学系统。 ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； 棱镜： 光的折射原理 在紫外区须采用石英池，可见光区一般用玻璃池。 吸收池（比色皿）用于盛放吸收溶液。 主要有 石英池和玻璃池两种。 规格为； 0.5、1.0、2.0、3.0cm 将光强度转换成电流来进行测量。光电检测器。 要求：对测定波长范围内的光有快速、灵敏的响应， 产生的光电流应与照射于检测器上的光强度成正比。 (1)光电管和光电倍增管 光照射到阴极表面时，会激发出电子，流向阳极，产生电流，通过放大器将电流放大，提高检测的灵敏度。 由多个光电二极管组成，光照射到二极管的半导体材料上，产生电子使电容放电。电容器再次充电的电量与每个二极管检测到的光子数目成正比，而光子数又与光强成正比。通过测量整个波长范围内光强的变化就可得到吸收光谱。 §9.3 显色反应与条件的选择 9.3.1 显色反应的选择 所选择的显色反应应满足下列要求： 1. 选择性好，所选择的显色剂最好只与被测组分显色，如果有干扰，干扰要易于消除。 2. 灵敏度高，所选择的显色反应的 κ ≥104，这样会使测定灵敏度较高，有利于微量组分的测定。 3. 对比度要大，有色配合物和