RNA干扰抑制骨肉瘤MG-63细胞β-catenin的表达.pdfVIP

第 4O卷第 1期第 13页 华 中科技 大学 学报 (医学版) Vo1．40 NO．1 P．13 2011年 2月 ActaM edUnivSciTeehnolHuazhong Feb． 2O11 RNA干扰抑制骨 肉瘤 MG一63细胞 ~l-catenin的表达* 张 帆 ， 陈安民， 郭风劲△， 陈剑峰 华 中科技大学 同济医学院附属同济医院骨科 ，武汉 430030 摘要 ：目的 通过抑制 Wnt信号通路核心蛋 白8一catenin在骨肉瘤细胞系 MG-63中的表达 ，探讨 pcatenin对 MG-63 细胞 的生长、细胞侵袭性 以及耐药性等方面 的作用 。方法 设计合成 p—catenin的 siRNA序列 ，Lipofectamine 2000转 染人 MG-63细胞。用 RT—PCR和 Westernblot法检测干扰后 catenin的mRNA和蛋 白表达情况 ，利用流式细胞仪检 测细胞周期，Transwell法检测细胞侵袭能力，CCK一8法检测细胞增殖 ，利用阿霉素检测细胞耐药性 。结果 干扰后 ，实 验组细胞 的B—cateninmRNA和蛋 白表达较对照组和空 白组显著降低 (均 P0．05)；细胞周期检测实验组与对照组和空 白组 比较差异无统计学意义 (P0．05)；Transwell法结果显示实验组细胞侵袭能力较对照组和空 白组显著下降 (均 P 0．05)；CCK一8法检测显示实验组细胞增殖力较对照组和空 白组略有 降低 ，但差异无统计学意义 (均 P0．05)；多柔 比星 敏感性检测显示实验组较对照组和空 白组细胞生长抑制率显著增加 (均 P％0．05)。结论 特异性抑制 —catenin基 因表 达可抑制骨肉瘤 MG-63细胞的侵袭能力，并增加 MG-63细胞对化疗药物阿霉素的敏感性 。 关键词 ：骨 肉瘤 ； B—eatenin； RNA干扰 中图分类号 ：R738．1；R73—37 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2011．01．004 Effectofp-catenin—specificsiRNAonExpressionof~-catenininMG-63OsteosarcomaCells ZhangFan，ChenAnming，GuoFengjing△etal DepartmentofOrthopedics，TongJiHospital，TongJiMedicalCollege，HuazhongUniversity ofScienceandTechnology，Wuhan430030，China Abstract Objective Toinvestigatetheroleofdown-regulationof cateninbysmallinterferingRNA(siRNA)onthesur— vival。invasionandchemosensitivityofhumanMG-63osteosarcomacells．M ethods ThesiRNA against8一cateninwasconstrue— tedand transfeeted intoMG一63 cellswith Lipofectamine 2000．Theexpression offt-cateninwasdetectedbvRT—PCR and W esternblot．Flow cytometry was used to detectthe eel1cycle．The proliferation ofcells was assayed bv CCK一8 meth— od．TranswelltestwasusedtodetecttheinvasionabilityofMG-63ceils．ChemosensitivitytodoxorubicinofMG-63cellswas determinedbyCCK一8．Results Ascomparedwiththeco