现代生物技术概论复习资料.docxVIP

1.基因工程：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA重组和转基因等技术，有目的地改造生物种性，使有的物种在较短时间内趋于完善，创造出更符合人们需求的新的生物类型，或者利用这种技术对人类疾病进行基因治疗。2.基因工程研究的理论依据：①基因具有相同的物质基础②基因是可以切割的③基因可以转移④多肽与基因之间存在对应关系⑤遗传密码是通用的⑥基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代3.基因工程三大要素：供体、受体、载体 DNA 功能单位：启动子、内含子、终止子4.基因工程技术的三大发明：①限制性内切酶的发现与DNA的切割②DNA连接酶的发现与DNA片段的连接③基因工程载体的研究与利用5.基因工程理论的三大发现：①DNA是生物的遗传物质②揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理③遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定6.基因工程研究的基本路线：切（分离的到目的基因）接（将目的基因连接到载体形成重组体）转（基因重组体转移到受体细胞并一起增值）增（重组体扩散得到大量细胞繁殖群体）检（筛选、鉴定转化细胞）表（将目的基因克隆到表达载体上）7.DNA变性：溶解在溶液中的双链DNA处于较高温度时，氢键断开而解成单链DNA的过程。复性：高温变性的DNA被逐渐冷却时分开的两条单链DNA又会重新结合成双链DNA。（方向是5ˊ→3ˊ）8.启动子：一段特定的直接与DNA 聚合酶识别并结合，决定基因转录起始与否的位点。9.内含子：编码区除各编码序列外，往往含有一个或几个长度各异的非编码间隔区。10.外显子：被内含子分割的小区。11.终止子：在基因编码区下游有一段使转录终止的的核苷酸序列。12.限制性内切核苷酸酶：能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并在合适的反应条件下，能精确特异的切割双链DNA分子的核酸内切酶。13.识别序列：限制性内切核酸酶在双链DNA上能够识别的核苷酸序列。14.同裂酶：来源不同，但具有相似的识别序列。15.同尾酶：来源不同，识别序列也不同，但是具有相同的粘性末端。16.影响限制性内切酶的因素：①DNA纯度：DNA中的杂质如蛋白质、酚、乙醇等都会影响酶的活性，常采用纯化DNA；加大没得用量；延长保温时间；扩大反应体积②DNA甲基化程序③温度：最适37℃，少数40-65℃④缓冲液（重要因素）17.星号活性：在飞理想条件下，内切酶切割与识别位点相似，但不完全相同的序列18.PCR ①基本原理：高温变性，低温退火，中温衍生②反应体系：模板、Tap-DNA聚合酶、引物、4种NTP、PCR缓冲液、镁离子③五要素：模板、Tap-DNA聚合酶、引物、4种NTP、PCR缓冲液④类型：反向PCR（扩增已知序列两侧未知序列的基因）；不对称PCR（所用的浓度一样，具有不同的反应速度）；反转录PCR（构建cDNA文库，反应灵敏）；多重PCR（用于检测特定基因片段的缺乏或存在）18.DNA连接酶：①概念：能催化双链DNA片段紧靠在一起的3ˊ—OH末端与5ˊ—P末端之间形成磷酸二酯键，是两末端连接。②种类：E.coliDNA连接酶只能催化双链DNA片段互补黏性末端之间的连接；T4DNA连接酶既可用于双链DNA片段互补黏性末端之间的连接，也能催化双链DNA片段平末端之间的连接。19.聚合酶：①分裂：依赖于DNA的DNA聚合酶：大肠杆菌聚合酶、DNA聚合酶、T4噬菌体；依赖于RNA的DNA聚合酶：逆转录酶②分类DNA聚合酶Ⅰ、Henow大片段聚合酶、T4DNA聚合酶、TapDNA聚合酶、逆转录酶、末端转移酶20.载体：①概念：携带目的基因在宿主细胞中进行无性繁殖或表达目的基因的蛋白质的一下DNA片段。②应具备的条件：在宿主细胞内独立稳定的复制；有合适的选择标记；具有单一的核酸内切酶识别位点；分子量小，拷贝数多，较高的外源DNA装载能力；容易从宿主细胞中分离纯化。③选择载体需要考虑的条件：增加酶切位点，便于重组；加入认识的标记基因，一般两个以上，便于选择；缩短长度，窃取不必要的片段，提高导入效率，增加装载量；改变复制子，变严谨为松弛，变少拷贝为多拷贝。21.Ti质粒：一种双环的DNA分子，大约200kb，但是能进入植物细胞的只有一部分，约25kb称为T-DNA。22.质粒载体、病毒克隆载体、人工染色体载体装载量越来越大。23.多克隆位点：人工构建的，紧密排列在一起，具单一多种限制性内切酶识别序列的一段DNA序列，可方便的用于外源基因的导入。24.穿梭质粒载体：人工配置的，含两个复制原点，可在两种宿主细胞中复制。25.获得目的基因的途径：①限制性内切酶发直接分离的到目的基因②利用PCR直接扩增目的基因③化学合成④构建基因组文库或cDNA文库获得目的基因26.基因组文库和CDNA文库的区别：①基因组文库克隆的是任何基因，包括未知功能的DNA序列，cDNA文库克