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分子标记技术及其在植物基因组研究中的应用 基因有限公司市场/技术支持部 本文献汇编包括以下内容: 1, 遗传标记简介 2, 分子标记介绍 3, 两种重要的分子标记技术AFLP和SNP及其在植物基因组研究中的应用 4, 有关仪器介绍 LI-COR公司的GLOBAL IR2 系统 PYROSEQUENCING公司的PSQ96 DNA系统 一, 遗传标记简介 以下内容摘自:邱芳 伏健民 金德敏 王斌遗传多样性的分子检测生物多样性1998年5月,第6卷第2期为41）形态标记(morphological markers)；（2）细胞标记(cytological markers)；（3）生化标记(biochemical markers)；（4）分子标记。前3种标记都是基因表达型的标记，可利用的多态位点较少，易受环境影响，不能满足物种资源鉴定的需要。直到1980年美国Botstein提出DNA限制性酶切片断长度多态性（RFLP）可以作为遗传标记，开创了直接应用DNA多态性发展遗传标记的新阶段。80年代DNA多聚酶链式反应（PCR）技术的出现，又推动产生了许多新型的分子标记如RAPD标记，SSR标记等。1992年由Zebeau和Vos发展起来的扩增片段长度多态性（AFLP）技术被认为是迄今为止最有效的分子标记，既有RFLP的可靠性，又有RAPD的方便性。分子标记的飞速发展促进了真核生物遗传图谱的构建，目前人类和各主要作物的RFLP遗传图谱已基本完成，可以提供基因组各基因间相互作用的全面信息，观察到群体内和群体间由于位点间互作引起的变异分化，在基础理论、遗传育种和物种进化等方面显示出重要应用价值。本文将阐述遗传多样性的主要检测方法，着重讨论分子标记及其在生物多样性研究方面的广泛应用。1　形态标记 　形态标记是指生物特定的肉眼可见的外部特征特性，如植物的株高、叶形、果实颜色等。从广义上讲形态标记也包括与色素、生殖生理特性、抗病抗虫性等有关的标记。由于简单直观，容易观察记载，长期以来，对物种的分类及资源鉴定都是以形态标记为主要的或初步的指标。由自然突变或物化诱变均可获得具有特定形态特征的材料，但所需时间长，并且可能同时诱变产生不利的重要性状。其缺点是数量较少，遗传表达有时不太稳定，易受环境条件及基因显隐性的影响。2　细胞学标记　　显微镜技术的改进，不仅使人类认识到微观世界的生物多样性，并且建立了染色体核型和带型分析技术来鉴别宏观物种的分类及核型演化。核型是指把动植物、真菌等的某一个体或某一分类群的体细胞内整套染色体显微摄影后再放大照片，按照染色体相对长度、臂指数、着丝粒指数、染色体臂数等4个参数将所有染色体作系统排列，可代表一个物种的染色体特征。染色体分带技术是将某物种染色体制片用不同物化手段处理，再用不同染料染色，在荧光激发下染色体臂会显示出不同的带数，如G带（Giemsa banding），C带（Constitutive heterochromatin banding），N带（Nucleolar organizer region banding）等，可明确鉴别许多物种核型中的任一条染色体，包括小麦黑麦在内的主要作物都有一套标准的染色体分带模式图［1、2］。此外，染色体结构变异如缺失、易位，非整倍体如缺体、单体、三体等都各有其特定的细胞学特征，也可作为一种细胞标记。显然，细胞学标记的数目也很有限。3　生化标记　　60年代初出现了同工酶标记。可从蛋白质水平来反映生物的遗传变异。同工酶是指具有同一底物专一性的不同分子形式的酶，具有组织、发育及物种的特异性。其基本原理是根据电荷性质差异，通过蛋白质电泳或色谱技术和专门的染色反应显示出同工酶的不同形式，从而鉴别不同基因型。由于其经济方便，易于操作，受到广泛应用。特别在品种质量和纯度鉴定以及动植物群体遗传结构研究中进行同工酶电泳分析已成为常规操作［3］，但实验结果随动植物不同发育时期、器官及环境而变化，可以利用的遗传位点数量比较小，对电泳分析的样品要求较高。 4　分子标记　　DNA的多态性是生物多样性的本质内容。为了深入掌握生物多样性的遗传学基础，最理想的办法就是直接观察测定DNA的变异。分子标记即是指以DNA多态性为基础的遗传标记。它具有以下优点：直接以DNA的形式出现，没有上位性效应，不受环境和其他因素的影响；多态性几乎遍及整个基因组；表现为中性标记；不影响目标性状的表达，与不良性状无必然连锁；有许多分子标记为共显性；部分分子标记可分析微量DNA和古化石样品。分子标记的种类及其发展 黎裕 贾继增 王天宇 分子标记的种类及其发展生物技术通报1999年 第15卷　第4期　邱芳 伏健民 金德敏 王斌遗传多样性的分子检测生物多样性1998年5月,第6卷第2期 Kristensen VN, Kelefi