沉默IGF1和EGF二受体基因的肝癌HepG2细胞株的抗瘤放疗增敏及机制.pdfVIP

广东医学 2016年6月 第37卷第 12期 GuangdongMedicalJournal Jun．2016，Vo1．37．No．12 · 1799 · 沉默IGF1和EGF二受体基因的肝癌HepG2细胞株的 抗瘤放疗增敏及机制水 叶鑫，陈俊花，何迎盈，李超，程浩 四川省德阳市人民医院肿瘤科 (618000) 【摘要】 目的 探讨同时沉默IGF1与EGF二受体基因的抗瘤放疗增敏以及其病理机制。方法 按照特定 的方式创造出靶向EGFR、IGF1R 以及两受体的小分子干扰RNA，并在一定的条件下设定出同所有基因不产生同 源的阴性对照质粒，对其进行转染超过48h之后选择使用射线对肝癌 HepG2细胞株进行照射。在成克隆的研究 过程中对细胞的存活分数进行检测，选择使用单击多靶模型与线性二次函数模型两种方式共同制定出细胞存活 曲线，进而获取放射生物学参数 DO、Dq、N以及 0l、B、SF2的数值。结果 将两个组之间进行对比我们可了解到， 其明显控制了细胞增殖以及起到诱导细胞死亡的作用，减缓 G．／S期的发展过程，bcl一2与cdI2【两者之间呈现 出 明显的下降趋势，p21与bax则呈上升趋势。并且同时沉默EGFR与IGF1R组与对照组细胞的D0数值则是0．588 与 2．0704Gy；Dq的数值则是0．5625与2。0307Gy；a值则是0．515与0．0216Gy—l；SF2值则是 O．22与 0．619。 这一组的DO、Dq以及SF2值全部呈下降趋势，0【值则呈上升趋势。结论 同时沉默EGFR与 IGF1R基 因对于肝 癌 HepG2细胞株增殖以及死亡起到干扰的效果，并且病理机制也 同bcl一2与cdk2等有着直接的联系，结合多种 方法对此疾病进行治疗是 目前发展前景比较广阔的方式，可在临床上进行推广及使用。 【关键词】 EGF受体；IGF1受体；肝癌细胞株HepG2 原发性肝细胞性肝癌 (hepatoeellularcarcinoma， EGFRmRNA (341～361)与 IGF一1R mRNA(444— HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居第2 464)靶位点的含绿色荧光蛋 白(GFP)的shRNA寡核 位 ，其特征是生长快、预后极差。肝细胞癌变的分子机 苷酸序列，并根据 invivogen企业的一种程序按照相应 制复杂 ，肝癌进展与肝中生长因子的过表达密切相关 ， 的要求与标准设定侧重于靶序列的两项互补 DNA序 因此，这些生长因子可能是肝癌治疗 的分子靶 目标。 列 ，随后采用荧光的方式进行记录。 国内外研究表明不同程度地分别沉默或抑制 EGF受 1．2．2 实验分组及转染步骤 将处在对数期的CNE一 体和 IGF1受体基因能有效地干扰肝癌细胞增殖、诱导 2放置在6孔板内，并且每一个孔的密度均是5×10’， 肝癌细胞凋亡，推测抑制多个受体分子可能是一种更 1d后当镜下的细胞数量超过70％的时候开始进行细 有前途的新的肝癌治疗途经 ，2014年 8—12月本研究 胞转染，在此过程之前舍弃细胞培养基，将其替换成无 探讨 EGF受体和 IGF1受体基因同时沉默对肝癌 血清以及双抗的RPMI一1640培养基，并把脂质体和 HepG2细胞放射敏感性及机制，为临床治疗提供一定 质粒这两种物质放置于温度适宜的环境 中，保证其温 的理论依据。 度均衡 ；按照Lipofectamine2000提供的说 明书操作，按 1 材料与方法 质粒 ：脂质体 =4 g：12IxL，选用 96孔板，在此过程中 1．1 实验材料 主要试剂：100Ixg／mL硫酸链霉素的 应预备出下述几种物品，即：(1)50IxL1640 +4p,g RPMI1640；胎牛血清；Lipofectamine2000；Cdk2、bax、bcl一2 plasmidDNA，5组质粒物质 ；(2)5OIxL1640+l2 L 与p21抗体；羊抗鼠(se一2060)以及羊抗兔(SC一2oo4)抗 lipofeetaminereagent，5组脂质体。 体；DMEM培养基；1号盖玻片 (其规格为24mm×50 1．2．3 检测转染的肝癌细胞 取 6块盖玻片于6孔 mm)、吸头 (其规格为 1mL、200IxL、20 )以及EP管