沉默Robo基因对人膀胱移形上皮癌细胞T24增殖的影响.pdfVIP

第37卷 第4期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1．37 No．4 2016年 7月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) July 2016 沉默Robo基因对人膀胱移形上皮癌细胞T24增殖的影响 王 晗t，姚狮章z，朱朝阳 ，程晓晖 ，田素民 ，李国营 (1．广东药科大学基础学院，广东 广州 510006；2．佛山市南海区第四人民医院泌尿外科，广东 佛山 528211； 3．河南大学附属淮河医院泌尿外科 ，河南 开封 475000) 摘 要： 【目的】研究Robo蛋白在人膀胱移形上皮癌细胞 (214)中的表达及沉默Robo基因对214细胞增殖的影响。 方【法】实验分为两组，对照组(不转染载体)和转染组(转染复合载体)，每组2O例。对照组体外培养214细胞，用免疫组织 化学、免疫荧光和蛋白质印迹检测是否有Robo蛋白的表达及其表达亚型；转染组利用 RNA干扰技术 ，寻找表达基因的沉默 位点．构建合理的表达载体 ，转染 T24细胞，免疫荧光化学观察细胞转染结果 ，蛋白质印迹来检测该表达基因沉默后蛋 白表 达的变化，M1Tr检测该表达基因沉默后细胞存活率变化。 【结果】①免疫组化和免疫荧光检测显示 T24细胞中有 Robol和 Robo4表达 ，且表达差异无统计学意义 (P=0．363和P=0．241)，而正常膀胱移行上皮细胞中无表达，蛋 白质印迹证实了免疫 组化结果(P=0．205)。②沉默Robo基因后，I24细胞中Robol和Robo4的表达受到抑制，尤其是 Robol的表达几乎受到全部 抑制(免疫荧光P=0．002，蛋白印迹 P=0．0001)，MTF法检测显示 Robol干扰组细胞的存活率明显下降，与对照组及 Robo4 组相比差异有显著性(分别为P=0．012和P：0．023)。 【结论】214细胞中存在Robol和Robo4两种蛋白受体，沉默Robo基 因后 ，Robol的表达和T24细胞的存活率明显下降。 关键词 ：人膀胱形上癌T24细胞 ：Robo蛋白；免疫荧光 ；免疫组化 ；蛋白质印迹；RNA干扰 中图分类号：R737．14 文献标志码 ：A 文章编号：1672—3554(2016)04—0514—08 EffectofSilentRoboGeneonProliferationofTransitionalEpithelialCarcinomaofHuman Bladder WANGHan ，‘YAOShi—zhang2，ZHUChao—yang，CHENGXiao—hui，TIAN Su—min ，LIGuo-ying (1．SchoolofBasicCoursesofGuangdongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China；2．UrinarySurgeryoftheFourth People’SHospitalofNanhaiDistrict，FoshanCity528211，China；3．UrinarySurgery oftheHuaiheRiverHospitalAffiliatedTo HenanUniversity，Kaifeng475000，China) Correspondingto：LIGuo—ying，E—mail：gzlgying820@sina．corn Abstract：O【bjective】TostudytheexpressionofRobosin214cellsandtheinfluenceinhumanbladder~ansitionalepithelial carcinoma214cellproliferationwhenRobogenewassilenced．M【ethods】Theexperimentwasdividedintotwogroups：controlgroup (wit