沉默S100A4基因对食管癌EC-9706细胞中MMP-9基因表达及浸润转移的影响.pdfVIP

广东医学 2013年 3月第 34卷第 6期 GuangdongMedicalJournalMar．2013，Vo1．34，No．6 · 831- 沉默 S100A4基 因对食管癌 EC一9706细胞 中 MMP一9基因表达及浸润转移的影响 汤少鹏 ，臧文巧 ，王涛 ，轩小燕 河南省胸科医院胸外科二病区(郑州450008)；郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室(郑州450052)； 河南中医学院第一附属医院血液肿瘤科 (郑州450000) 摘【要】 目的 探讨 S100A4基因在食管癌侵袭转移中的作用和可能机制。方法 化学合成2对靶 向 S100A4的siRNA，脂质体介导转染入人食管癌 EC一9706细胞，同时以转染阴性对照 siRNA细胞和未转染空 白细 胞作为对照。转染48h后，半定量 RT—PCR检测各组细胞 S100A4和基质金属蛋 白酶 一9(MMP一9)基因mRNA 表达的变化，Westernblot检测各纽细胞S100A4和MMP一9基 因蛋 白表达的变化；转染48h后 ，侵袭小室检测各 组细胞穿膜细胞数的变化，划痕实验检测各组细胞迁移能力的变化。结果 RT—PCR和 Westernblot结果显示： 与转染阴性对照siRNA的细胞和未转染的空白细胞相比，转染2对靶向S100A4的siRNA的细胞 S100A4mRNA 和蛋白的表达明显降低，差异有统计学意义(P0．05)；与转染阴性对照siRNA的细胞和未转染的空白细胞相比， 转染2对靶向S100A4的siRNA的细胞 MMP一9mRNA和蛋 白的表达同样明显降低，差异有统计学意义(P 0．05)。Boyden侵袭小室结果显示：与转染 阴性对照 siRNA的细胞和未转染的空白细胞相 比，转染2对靶 向 S100A4的siRNA的细胞穿膜细胞数明显下降，差异有统计学意义(P0．05)；划痕实验结果显示：转染2对靶 向 $100A4的siRNA的细胞的迁移距离明显小于转染阴性 siRNA的细胞和未转染的空白细胞 ，差异有统计学意义(P 0．05)。结论 S100A4参与食管癌侵袭转移的发生，S100A4可能通过影响MMP一9的表这参与此作用。 【关键词】 食管癌；S100A4；基质金属蛋白酶一9；侵袭转移 Theeffectsof$100A4silencingontheexpressionofMM P一9inEC一9706cellsanditsmetastasisability． TANG Shao—peng ，ZANGWen—qiao，WANGTao，XUANXiao—yan． TheDepartmentofThoracicII，HenanChest脚 一 tal，Zhengzhou450008，China Correspondingauthor：XUAN Xiao—yan．E—maiZ：xuanxiaoyan@ 163．com 【Abstract】 Objective ToinvestigatetheroleofS100A4intheinvasionandmetastasisofesophagealcancerand thepossiblemechanism．Methods TwosiRNAstargetingS100A4werechemicallysynthesizedandtransfectedintoEC一 9706cellsbyLipofectamine 2000．EC一9706cellstransfectedwithnegativecontrolsiRNA andblankEC一9706cells wereusedascontrols．ThemRNA andproteinlevelsofboth$100A4andMMP一9wereevaluatedbysemi—quantitative RT—PCR andWesternblot，respectively．BoydenchamberwasusedtoevaluatetheinvasioncapabilityofEC一9706cells invitro．ThemobilityofEC 一9706 cellswasevaluatedbywound—healingassayinvitro．Results Theexpressionof S100A4 mRNA and proteinwassignificantlydown—-regulatedinEC ——9706 cellstransfected with2 siRNAstargeting S100A4 (P0．05)