沉默survivin对增加晚期宫颈癌基因放疗效果的实验研究.pdfVIP

· 692 · 医学研究生学报2010年7月 第23卷 第 7期 JMedPostgra，Vo1．23，No．7，July，2010 论 著 (基础研究) 沉默 survivin对增加晚期宫颈癌基因放疗效果的 实验研究 马 荣，唐丽萍，耿晓星，傅松滨 [摘要】 目的 探讨 survivin表达抑制与晚期宫颈癌放疗敏感性的关系。 方法 设计并构建靶 向survivin的shRNA 真核表达载体 (psh—SVV)，转染宫颈癌 Hela细胞 ，用实时PCR法检测 RNA干扰 (RNAinterference，RNAi)后 survivinmRNA的 表达 ，用Westernblot检测 survivin蛋 白表达，观察survivin基因沉默后放射线对Hela细胞生长活性的作用 ，转染psh—SVV对Hela 细胞凋亡的影响，裸鼠移植瘤生长速度及对放射线敏感性的变化。 结果 测序结果证实载体构建成功。转染 psh-SVV的实 验组 survivinmRNA表达明显低于 3个对照组，差异具有统计学意义 (P0．05)。实验组 survivin蛋 白表达亦明显低于 3个对 照组 ，差异具有统计学意义 (P0．05)。放疗后72h实验组细胞生长抑制率明显高于 3个对照组，差异具有统计学意义 (P 0．05)。实验组 caspase-3活性显著高于其他 3组 (P0．05)。survivin基因沉默后，裸 鼠移植瘤生长速度减慢，survivin低表达 的实验组小鼠对放射线敏感。 结论 psh—SVV通过 RNAi有效降低宫颈癌Hela细胞 survivin的表达 ，抑制 Hela细胞增殖 ，诱 导凋亡 ，增加Hela细胞对放射线的敏感性。 [关键词】 Survivin；基因放疗 ；晚期宫颈癌 [中图分类号】 R815 【文献标志码】 A [文章编号】 1008—8199(2010)07-0692-05 RNAinterferenceagainstsurvivinenhancestheeffectofgenetic-radiotherapyonadvancedcervical cancer MA Rong，TANG Li—ping，GENG Xiao—xing，FU Song-bin (DepartmentofGynecology，TumorHospitalAffiliatedtoHarbinMedicalUniversity，Harbin150040，Heilongfiang， China) [Abstract] objective ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetherelationshipbetweenRNAinterferenceagainstsurvivin andtheradiosensitivityofadvancedcervicalcancer． M ethods W edesignedandestablishedtheshRNAcukaryoticexpressionvector (psh—sw)targetingsurvivin，andtransfectedHelacellswithpsh—SVV．ThenwedetectedtheexpressionsofsurvivinmRNAandsurvivin proteinfollowingRNAinterference(RNAi)byreal—timePCTandWesternblot，andobservedtheeffectofX—rayonthegrowthactivity ofHelacellsafterthesurvivingenesilencing，theinfluenceofpsh—SVVtransfectiononcellapoptosis，andthegrowthandradiosensitivity ofthexenograftinthenudemice． Results Thesequencingtestconfirmedthesuccessfulestablishmentofpsh—SVVagainstsurvivin． BoththeexpressionsofsurvivinmRNA andsurvivinproteinweresignificantlylowerinthepsh—SVVtransfectedgroupthanintheother threecontrolgroups(P 0．05)，while