植物细胞工程10.docVIP

植物细胞工程（cell engineering）是指在植物细胞水平上进行的遗传操作，即应用植物细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的理论和方法，通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作，获得重构的细胞、组织器官及个体，以达到快速繁殖，改良品种及生产植物产品的工程学科。 研究内容：1.培养繁殖细胞、组织、个体 2.改造细胞 培养：器官培养技术 胚胎培养 组织培养 细胞培养技术 原生质体培养技术 改造：细胞融合 细胞拆合 染色体操作 基因转化 植物细胞和动物细胞离体培养的异同点：相同点：1.模拟体内环境，使细胞生长继续生长发育 2.培养结果都是培养物出现与体内相似的生长行为。 不同点：1.取材范围不同 2.培养条件不同 3.生长形式不同 细胞学说（cell theory）：由德国植物学家施莱登和动物学家施旺分别于1838年和1839提出，认为一切动物和植物体都是由细胞构成，细胞是生物结构、功能和发育的基本单位。细胞学说是19世纪三大发现之一. 细胞全能性（totipotency）：德国植物学家Haberlandt在1902年提出，作为高等植物器官和组织的基本单位的细胞有可能在离体条件下实现分裂分化，乃至形成胚胎和植株。 分化：受精卵在细胞分裂的过程中，形成具有极性的胚，从而形成不同器官的过程。 脱分化：离体培养条件下，一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生组织细胞状态或胚性细胞的状态的过程就是细胞脱分化。 再分化：脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在特定的条件（离体培养）下，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状体，进一步发育成完整生物体，这一过程称为细胞再分化。 胚状体：是指植物细胞、组织或者器官的离体培养中，起源于一个非合子胚，并经过胚胎发育过程分化出的类似胚一样的细胞群。 胚状体产生的方式： 1.直接在器官上发生 2.培养物形成愈伤组织，再由愈伤组织形成胚状体 3.在花药培养中，由小孢子发育成胚状体 4.在单细胞和原生质体培养中，先形成胚性细胞团，再形成胚状体 胚状体途径再生植株的优势 数量多 速度快 结构完整 植物细胞工程发展简史 萌芽阶段（19世纪——1929） 奠基阶段（1930——1959） 应用阶段（1960——） 植物细胞工程的应用 细胞工程育种（体细胞突变、细胞融合、远缘杂交胚挽救、倍性育种甚至转基因研究） 种苗脱毒与快速繁殖 生产有用次生代谢物质（如药物、色素、食品添加剂、酶、农药等 ） 离体种质资源保存 人工种子 在植物遗传、生理生化以及植物病理等基础研究中的应用 育种上的应用 实验室是细胞工程研究的主要场所，应能满足清洗、培养基制备、储藏、无菌操作、培养、鉴定等多方面的工作需要。 第一节 实验室设计 洗涤间 培养基配制间 消毒间 无菌操作间 培养室 鉴定室 洗涤间 面积:30-50m2 配置：在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等，地面应耐湿并排水良好。 培养基配制间 面积60平方米左右 配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。 冰箱以体积180-200L为宜(最好冷藏容积大于冷冻容积），用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。 天平应有不同感量。 消毒间 配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。 无菌操作室（接种室） 通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。 培养室 为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和