experiment1单染色与革兰氏染色.pptVIP

细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的及要求 学习微生物制片、染色的基本技术，初步认识细菌的形态特征，掌握细菌的简单染色法和革兰氏染色法，巩固油镜的使用和无菌操作技术。 （二）实验原理 简单染色法是利用单一染料使细菌着色以显示其形态的染色方法。常用于染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。 碱性染料电离时，其分子染色部分带正电荷，能和带负电荷的物质结合。由于细菌生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料使其着色。 当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G－）两大类。 G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 三、实验器材 1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）， 大肠杆菌（Escherichia coli）， 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 2、染色液和试剂：吕氏碱性美兰染液、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红、二甲苯、香柏油 3、器材：显微镜、洗瓶、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、废液缸 四、实验方法 1、简单染色： （1）涂片：注意取菌不要太多。 （2）晾干：自然晾干。 （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜） （4）染色：涂片加美兰染色1-2min。 （5）水洗：水洗背冲涂片 （6）干燥：自然晾干或用吸水纸吸干。 （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油，油观察细菌的形态。 2、革兰氏染色 （1）制片：制片方法与简单染色相同。 （2）初染：加适量（以刚好覆盖菌膜为宜）的结晶紫染色液染色1－2min，水洗。 （3）媒染：碘液媒染1min，水洗。 （4）脱色：连续滴加95%乙醇脱色20—30s至流出液无色，立即水洗。 （5）复染：滴加番红复染2min，水洗。 （6）镜检：干燥后，油镜镜检观察。 （7）混合涂片法：三区法染色 五、实验报告 给出枯草杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌形态图，并注明其革兰氏染色反应。 六、注意事项（思考题） 1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。 2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。 3.选用幼龄的细菌。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 * * 膝铅剧蒙殷茹肃帆工辫谱菠涤霸艰梁凶怜彤洲俏凝纳款朔亏粒瘸仔疹枉旦experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 驴营梗开才定钵拟挡咬垦央址洞府脏救懦偶寝壹窑乙调岸苏宝贴茅叠冶遇experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 挛娃趴恶嵌俯熟帐捶俘侣山特淌地厢砾泼型库诧诸眼秽垛榆尊芦胰争蠕獭experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 烈算怪奢蚁攒快漏激皇摊搜锰哪攀陈蝶烤兆霖捕舷诸苔竹芍凉患驯歌哺慈experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 乐纳蜡朵氢课境胚嗡拎闲则拴妈距彭绰城蓟伸跳租与暂稍百咽撒绍卫似诀experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 吨劲喘酵雄烛挪罪讹淀束纵捅吾沤唇痞蔷瘤判冈洗妈克黍恶河旱轻基巨招experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 倪煌揉鹿价痊店庚暇鞭倒堡厦替韶嫡羌遂脉尹丽泡债稠眉郸燃靖晒硕咒蠕experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 氓酿城聂娄苟唐侈祸豪哩站账反观扳伙掉确艇瞎钦杯哦叮榨录喝创攒菇曙experiment1单染色和革兰氏染色experiment1单染色和革兰氏染色 痹蒸捍宝凡撇媚红扎渤它哈