细菌抹片制做和染色.docVIP

实验三 细菌的抹片制做及染色 【目的要求】 了解细菌简单染色法和革氏染色法的原理 (2)掌握细菌抹片标本的制备及几种常用染色法的操作步骤 【器材】 (1)大肠杆菌、葡萄球菌、巴氏杆菌等18．24小时液体培养物和斜面培养物。 (2)美蓝染色液、革兰氏染色液和瑞特氏染色液。 (3)载玻片、接种环、酒精灯、染色架、蜡笔、吸水纸等。 【原理】 细菌个体微小，无色而半透明，折光性弱，在普通光学显微镜下观察活细胞时，只能见其大致轮廓。必须制成抹片标本，应用适当染料染色后，才能较清楚地观察到细菌的形态及某些构造。此外，还可根据细菌呈现出的不同颜色反应而对其进行鉴别。 【内容和方法】 (一)细菌抹片标本的制备 1.抹片 根据所用材料不同，抹片的方法亦有差异 (1)固体培养物 用经酒精灯火焰烧灼灭菌后的接种环，蘸取无菌蒸馏水(无菌肉汤、生理盐水均可)一环于清洁无油脂的载玻片中央，再钩取细菌的固体接着物少许混于蒸镏水中，涂抹成直径为1—1．5cm大小的均匀菲薄的抹片。 (2)液体培养物 可直接用灭菌接种环钩取细菌培养液1．2环，涂抹于玻片上即可。但应注意净管底Iili物摇匀，以免影响涂片效果。 (3)组织涂片 用灭菌的剪刀镊子取被检组织一小块，以其断面在玻片上压印或涂抹成适当大小的薄片。如为肝脾组织，脓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上。无论何种方法，切忌涂抹太厚，否则不利于染色和