实验二斑马鱼的急性毒性实验概要.pptVIP

* * 实验二、 鱼的急性毒性实验 一、实验目的 通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性实验的设计、条件、操作步骤，以及实验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、实验原理 在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度（LC50)。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。我国可采用的实验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼、野生的食蚊鱼、斑马鱼等。本实验选用斑马鱼作为实验材料 斑马鱼(zebrafish)是一种小型热带淡水鱼，最早是作为胚胎发育生物学和遗传学的实验动物模型，被广泛地运用于早期胚胎发育基因表达调控的研究。 三、实验材料与试剂 1、 斑马鱼，购自绍兴花鸟市场，体重0.15g左右，体长2.8cm，实验前在充分曝气的自来水中驯养7天。 2、重铬酸钾（分析纯） 3、实验用水选用曝气3天的自来水，硬度为60mg/l 四、实验步骤 1、预实验 分别配制吡虫啉浓度为1、10、100、1000mg/L的处理液10L置于各塑料桶中，每桶放斑马鱼6条，每24h换一次实验处理液，实验持续96h。每日至少两次记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。求出24h100% 死亡浓度和96h无死亡浓度。 2、正式实验 根据预实验得出的结果，分别配制吡虫啉浓度为280mg/l、294mg/l、308mg/l、322mg/l、336mg/l、364mg/l的处理液10L，以不加吡虫啉的 自来水作对照组。每个处理组放斑马鱼10条 。每24h换一次实验处理液，实验开始后3h或6h观察各处理组鱼的状况，并记录实验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积等）。在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反应等，即可判断该鱼死亡。观察并记录死鱼数目。另外，实验结束时，对照组的死亡率不得超过10%，否则实验结果不可靠，需再次实验证实。 五、实验报告 1．数据处理 以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、96h的半致死浓度（LC50）值。 如果实验数据不适宜计算LC50，可用不引起死亡的最高浓度和引起100%死亡的最低浓度估算LC50的近似值，即这两个浓度的集合平均值。 2、化学物质急性毒性分级 依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5级，如下表所示： 鱼类急性毒性实验毒性分级标准 鱼起始LC50/（mg/L） ＜1 1~100 100~1000 1000~10000 ＞10000 剧毒 高毒 中等毒 低毒 微毒 3、编写报告 在实验报告中应包括：实验名称、目的、实验原理、实验的准确起止日期，以及： （1）实验鱼的种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况。 （2）受试物质名称、来源、物化性质和保存方法。 （3）实验用水的来源、物化性质和实验前的处理等。 （4）实验溶液的浓度与配置方法、实验温度。 （5）实验条件，如容器形式、实验液的体积与深度、受试生物数目。 （6）计算实验开始后24h、48h、72h、96h时的LC50值，及其毒性分级。