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柠檬酸测定综述 摘要：柠檬酸作为一大有机酸，广泛应用于有关行业，为此对于其量的测定至关重要。例如在食品中，柠檬酸作为添加剂，其含量是检测食品质量的一项重要指标。本综述简述了柠檬酸测定的方法，如高效液相色谱法、反相高效液相色谱法、离子色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等。 关键词：柠檬酸；测定方法；高效液相色谱法；反相高效液相色谱法；离子色谱法；气相色谱法 前言 柠檬酸是一种广泛存在于动植物组织和各种水果、蔬菜中的有机酸，与人类的健康密切相关，可增强人体的正常代谢[1]。 由于其物理性能、化学性能、衍生物的性能,被广泛应用于一些食品加工领域。 如用于各种饮料、汽水、葡萄酒、糖果、饼干、罐头果汁、乳制品等食品的制造 [2]。在食品上，柠檬酸的含量对其味道的影响很大，并且在某些食品的品质指标测定的一大指标。但是柠檬酸的使用范围是受到严格限制的[2]，不能无限制的添加。为此，如何定性和定量的测定柠檬酸的含量有重要的意义。 目前，测定柠檬酸的方法有高效液相色谱法[3]、反相高效液相色谱法[4]、离子色谱法[5]、气相色谱法[6]、微分电位溶出法[7]、毛细管电泳法[8]、动力学法[9]、酶法[10]等。现将各种测定方法在柠檬酸测定中的使用逐一介绍。 分析方法 2．1 高效液相色谱法（HPLC） 高效液相色谱法是目前应用最多的色谱分析方法,高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成. 与经典液相色谱相比有以下优点:速度快、分辨率高、灵敏度高、色谱柱可反复使用、样品量少且易回收等。 利用高效液相色谱法测定柠檬酸有以下优点：能够直接进行检测，避免杂质等的影响；测定方法简便，时间短，结果准确。特别是对于芳香族有机酸和多元酸,已被广泛用于各种食品和天然物中有机酸的测定[2]。王永军等[3]在利用HPLC检测方法时，建立了一种准确对发酵液中柠檬酸含量测定的仪器方法,在检测范围6～16mg/ mL 之间呈线性, R = 0. 999 7 , RSD 为±0. 8 %～1. 2 %( n = 6) ,最低检测浓度为0. 02mg/mL。这种方法简单、灵敏、重现性好，避免了由于化学转化所引起的 测定误差，以及发酵液中色素的影响。 对于采用HPLC法测定柠檬酸的方法，在文献中有很多。刘加兰等[11] 用Atlantis C18(5μm，4．6×150mm)色谱柱，以0．05 mol／L Na2HPO4(pH 2．8)溶液做流动相，流速0．8mL／min，紫外检测波长210 nm，一次性分离柠檬酸发酵液中的草酸、苹果酸、a一酮戊二酸、柠檬酸、富马酸、乌头酸、柠康酸。建立了七种有机酸成分的回归方程，各有机酸回收率大于97％，相对标准偏差(RSD)0．27％一3．24％。唐慧慧和蔡清宇等[12]以O.8% NH4H2PO4水溶液为流动相，采用色谱柱Reliasil C18(4.6×250mm,5μm),Agilent 1100 series液相色谱系统；四元泵G1311A；柱温箱G1316A；检测器VWDG1314A Agilent Chemstation色谱工作站的方法，建立了净乌梅及乌梅炭饮片中柠檬酸、苹果酸的测定。另外，王剑飞等人[13]采用甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾（5:95）为流动相，流速为0.7ml/min，SPD-M20A型二极管阵列检测器，色谱柱：lnertsilODS-SP4．6x150mm：预柱：Shim-packGODS，分析5中葡萄酒中柠檬酸的含量，结果显示均符合要求。谭志静[14] 采用Hibarcolumn RT 色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液(p H = 2. 5)为流动相,在检测波长为214nm 的条件下测定了葡萄果肉和葡萄皮中有机酸(柠檬酸、苹果酸等) 含量。贺永鸿等[15] 选用Kromasil NH2 色谱柱,流动相为5 % 的乙酸水溶液,检测波长为250nm ,测定白糖中的柠檬酸。而陈琳[16]等为了检测乌梅丸中柠檬酸的含量采用的方法类似于王剑飞的方法，不同之处在于流动相的流速设定在0.5mL/min，检测波长为214nm。 HPLC 灵敏度非常高,但是样品的预处理操作繁琐,再加上测定周期长、实验成本高、测定完后需要清除残留样品,若能与其它技术联用,缩短检测周期、降低实验成本,该方法在检测有机酸方面会有更大的进展[2]。 2. 2 反相高效液相色谱（RP-HPLC） 反相高效液相色谱，是目前应用范围很广的色谱分析方法，其分离方法和检测方式有多种，在检测时根据样品构成与性质来选择所需的色谱条件，如色谱柱等。一些常见的ODS 色谱柱如Hypersil 、Eclip se Zorbax XDB、SinoChrom、Nucleosil 等均可以用于食品中柠檬酸的分析测定 [2]。柠檬酸在水