菜花DNA提取.pptVIP

菜花中DNA的提取;一.实验原理;2. 核酸提取的步骤 1）破碎细胞（材料不同，方法不同） 匀浆器，捣碎器，溶菌酶消化，碱裂解等。 2） 除杂质，提DNA 杂质：蛋白，多糖，脂类，RNA ，DNase A. DNase的抑制 DNase需Mg2+,Ca2+激活，所以提取时加0.01M EDTA或EDTA钠盐。（螯合金属离子） 加去垢剂或变性剂（SDS），可使DNase变性失活 ;B.? 除RNA 酶法：加RNase 调节pH：RNA能在室温条件下被稀碱水解成核甘酸而DNA对碱较稳定（核酸的理化性质），所以提DNA一般要在偏碱的环境中提取，提RNA要在偏酸的环境中稳定。 调节盐浓度(盐的分步沉淀)：在浓NaCl（1－2M）溶液中，DNA溶解度大，RNA溶解度小；在稀NaCl（0.14M）中，DNA溶解度小，RNA溶解度大，因此可利用不同浓度的NaCl溶液将DNA和RNA从样品中分开。 ; C. 除蛋白 加去垢剂或变性剂（SDS，十二烷基硫酸锂LDS，十二烷基??酸钠，脱氧胆酸钠）使蛋白变性，与DNA分开； 用有机溶剂沉淀，除去蛋白 常用的有机溶剂：苯酚，氯仿，异丙醇，醚，8－羟喹咛，间甲酚等 本次实验所用：氯仿：异戊醇＝24：1 氯仿：使有机相和水相易分层，增加核酸得率，同时可除去脂类。 异戊醇：可减少泡沫，也能促使有机相，水相分离。; D. 除糖，脂类 对于含糖量高，含脂高的样品需要做 ;二. 利用盐不同浓度提取DNA;3） 实验器材;三. 实验步骤;3.向上述沉淀物加入0.14mol/L NaCl-0.15mol/L EDTA溶液2ml/管，25％SDS溶液0.25ml/管,搅拌至混匀。置60℃水浴保温10min，取出冷至室温。此步操作系使核酸与蛋白质分离。;四.实验结果分析讨论;五. 琼脂糖凝胶法检测DNA