诱导子逻辑门功能遗传线路.ppt

生物线路的基础研究 生物线路的基础研究 模拟逻辑功能的生物线路 其他方面的生物线路基础研究 逻辑门功能生物线路 基因调控开关 人工级联生物线路 多细胞系统脉冲发生器 控制生物数量的生物线路 人工多细胞团系统 自激振荡环 逻辑门功能遗传线路 一、逻辑“与”门功能 基因 启动子 操纵子 基因 RNAp 利用激活因子和诱导子实现逻辑“与”门功能 诱导子 逻辑门功能遗传线路 lacI tetR gfp 启动子1 启动子2 当LacI和TetR同时存在时，gfp基因才能表达 逻辑门功能遗传线路 lacI tetR gfp cI 启动子1 启动子2 复杂的逻辑“与”门功能 带有“记忆”功能的“与”门生物线路 逻辑门功能遗传线路 二、逻辑“或”门 lacI tetR gfp 启动子1 启动子2 gfp 启动子3 或门逻辑图 IPTG aTc 基因调节开关 一、翻转开关（Inverter） 输入低时输出高，反之，输入高时输出低。 二、双相开关（Biphasic switch） 双相开关机理： 低浓度夫人CI蛋白与OR1结合并促进与OR2的结合和自身的转录 当CI 蛋白浓度增高时，OR1、O2和OR3三个位点都被结合 cI 基因的转录反而被抑制，CI蛋白浓度逐渐降低 三、核糖开关（Riboswitch） 主要是通过核糖核酸（RNA）构象的改变来实现“开关”的功能，阻止和开启目的蛋白的表达。 模块化的核糖开关 CR RBS gfp Pcr 与RBS互补序列 转录后 Cr RBS AUG 发夹结构 RBS AUG cr 另外一个启动子启动后表达以一个非编码RNA，taRNA + = taRNA crRNA cr RBS 四、双稳开关 gfp 启动子2 启动子1 阻遏子2 阻遏子1 诱导子1 诱导子2 双稳开关的生物线路设计 一、生物线路设计 状态A：当启动子1基因被表达，阻遏子2被表达，其产物导致启动子2被抑制，阻遏子1不表达，系统稳定于启动子1启动状态B：当启动子2基因被表达，阻遏子1被表达，其产物导致启动子1被抑制，阻遏子2不表达，系统稳定于启动子2启动 状态A 状态B 诱导子2 诱导子1 二、遗传线路实现 方案设计： A：启动子：Ptrc-2； 抑制子：lacI；诱导子：IPTG B：启动子：Pls1con； 抑制子：cIts； 诱导子：温度 C：启动子：PltetO -1；抑制子：tetR；诱导子：aTc 一类是利用A方案和B方案在PTAK载体上构建双文开关 一类是利用A方案和C方案在PIKE载体上构建双文开关 三、数学模型建立 U，V分别表示两种阻遏子的量 α1和α2为两种启动子在没有阻遏子时的表达速率 -U和-V表示两种阻遏子的自然降解速率 β和γ为启动子的抑制参数数值越大表示抑制越强 自激振荡环 一、遗传线路设计 tetR-lite lacI-lite PR PI tetO1 cI-lite TetR CI gfp PL IacO1 PL IacO1 自激振荡环基因线路图 luxR LuxR cI gfp luxI TetR 细胞群体系统脉冲发生器 信号发生细胞 脉冲发现细胞 luxR LuxR cI gfp luxI TetR 信号发生细胞 脉冲发现细胞 I aTc AHL CI luxR LuxR cI gfp luxI TetR 信号发生细胞 脉冲发现细胞 I aTc AHL CI 其他方面的合成生物学基础研究 一、控制群体数量的遗传线路 lacZa-ccdB gfp luxR luxl LuxR LuxI LuxR CcdB Plac/ara-1 CcdB LacZ PluxI 细胞凋亡是指细胞接受某种信号或受到某些因素刺激后，会发生主动基因调控的消亡过程。 AHL 二、人工细胞群体图案系统 系统有两种细胞组成：发生器细胞和接收器细胞 luxl CI 信号发生细胞