实验五 DNA粗提取和鉴定.pptVIP

实验五  DNA的粗提取与鉴定 ;一、目的要求： ;二、实验原理 ;;三、实验材料及用具 ;四、实验步骤 ;录栖譬曾渣拱硼邵台渤凡掀烙锚乱鸦逗吕咆筐泅遏吮辱翻靛医谢陌梗琼旅实验五 DNA的粗提取与鉴定实验五 DNA的粗提取与鉴定;DNA的鉴定 ;;俭逗饿瓤陌孩礼宇馁垃渗近胶酿酪洋彝侯波汉耗擒丈猾匪呀勿耗懦怎胯轧实验五 DNA的粗提取与鉴定实验五 DNA的粗提取与鉴定;五、注意事项 ;3．实验中共有3次过滤。过滤时使用的纱布层数与取其滤液或黏稠物有关。第1、3次要用其滤液，使用的纱布为1—2层，第2次是要用其滤出的黏稠物，使用的纱布为多层。 4．实验中有5次搅拌，除最后一次搅拌外，前4次搅拌均要朝向一个方向，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。 ;5．实验中有两次使用蒸馏水。一次在第1步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，不应少于5min，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第3步，加水是为了稀释氯化钠溶液。 6．实验中有三次加氯化钠溶液。在步骤2中，当加入氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中。在步骤5中，加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。在步骤8中，加的NaCl溶液的浓度比前2次低的多，但还是为溶解DNA。 ;7．在步骤7中，必须使用冷酒精(至少在5℃以下存放24h)，并且将1份含DNA的NaCl溶液加入到2份的冷酒精中。如果悬浮在溶液中的DNA丝状物较少，可将混合液放入冰箱中再冷冻几分钟。 8．盛放鸡血细胞液的容器和实验中的烧杯和试管最好也是塑料制的，因为玻璃制品表面带电荷，DNA中的磷酸基带相反的电荷，会被吸附于玻璃表面，减少DNA含量。 ; 9．本实验成功的关键，是保证提取到足量且较纯净的DNA。因为DNA在细胞中含量少，所以在下列步骤中应特别注意：在步骤1中使用的鸡血的量要在5mL以上。提取细胞核物质时要充分搅拌5min以上。在步骤2中要充分晃动烧杯，在步骤3中加蒸馏水要控制好量，同时应用玻璃棒缓缓搅动使DNA聚集其上???在第4步中要使用多层纱布过滤，在第5步中要充分搅拌，在第7步中使用冷酒精。;六、讨论 ;香蕉DNA的粗提取与鉴定