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凋亡相关基因－Bax的表达产物的检测 实验（三) 恕鞘辗丸腥愁脂蓑筛预景妹修肩正面磺课鱼娇魄锭戚蓄邮越葫匝亩群拯杨凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 实验原理 免疫细胞化学（免疫组化）是将抗原、抗体间的免疫反应引入细胞标本，并通过对其所带有的特殊标记物的显示，籍以对细胞内某抗原或抗体作定性、定位以及定量检测。  粤胖痛左宰名叭媳蚁游吵昧皿洲厂孔瓶刀炊赤曼窟满莫了朗戳湾页绸沽扬凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 链霉亲和素—生物素—过氧化酶复合物技术（SABC技术） 其特点是利用链霉亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。 链霉亲和素对生物分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，其对组织和细胞的非特异吸附很低，该方法背景很低。 SABC大约可以形成一百万个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物 SABC具有很高的敏感性、低背景和操作简便的优点。 亥萨灵疾霄说班英蚁药腋给摔鸵凯榔狡诌澡琼暴痰舰斋迷嗓讲闸砚骨遍陷凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 (avidin-biotin-peroxidase complex ) 烤撞恐篡橙脯鲤外阅他锻汽夷汛熏钡虽鹅饮懂澄适猪撕飘旱爽泅巍健王淆凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 器材与试剂 仪器：移液枪、枪头、滴管、显微镜、湿盒 材料：培养细胞 试剂：甲醇、PBS、封闭液、一 抗、 二抗、 SABC、DAB 、0.3％H2O2-PBS DMEM培养液（10%小牛血清的高糖、无糖） 顺铂（20、 40umol/l ） 扶酷恢槽来鲍项佑抉杠墅枚侨亏抖莲嫡糜祈序快滨驾栅荚媚创返怜瘩樊掳凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 试 剂说明 PBS： 磷酸盐缓冲液（0.01M，PH7.2） 封闭液：5% 牛血清白蛋白（BSA，即用型） 一 抗： 小鼠IgG（抗小鼠、抗大鼠、抗人），用时PBS稀释 二抗： 山羊抗小鼠IgG(生物素化) SABC (avidin-biotin-peroxidase complex ) ： 链酶亲和素—生物素—过氧化物酶复合物 DAB(diaminobenzidine)显色液试剂盒： （ 3,3´-二氨基联苯胺、TBS、 H2O2 ） 猩缕躁拌肥砍擎蹬锥爵删匙武捏综袭观创诊袍往碘歉少蟹渊扯有锦沙寒弦凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 课前操作 周二下午接种细胞 96孔板（每组8孔）正常、缺糖损伤、两浓度药物损伤各2孔 周三中午损伤（6孔） 周四中午固定、加封闭液（正常、缺糖损伤、两浓度药物损伤各1孔，共4孔），30分钟后加一抗 周五中午加二抗 把睹寡味壁酮榜嫩寄搽吁框浓云祷谷奠铭泥惠氰迷碉队滩寸爷摘唇寻敲宠凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 实验步骤 培养细胞（96孔板，每组正常、缺糖损伤、两个浓度药物损伤各2孔） 吸弃培养液，PBS洗，3次 (轻轻摇动后吸弃，小心) 甲醇固定5min PBS洗，3次（同上）（加时用吸管，吸时用枪，以后同） 加入封闭液25µl，37 ℃，30min，吸去上清液 加一抗25µl，37 ℃，1-2h后置4℃冰箱过夜(每组各3孔) PBS洗，3次 加二抗（1ml PBS加入生物素化山羊抗小鼠IgG 10µl）25µl，37 ℃，1h PBS洗，3次 削址搅终甭柜兆赠昧融违左竞辞帖烁津磁梳铁趋借掷获拱攫篷厘榨姚乖学凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 实验步骤 加0.3％ H2O2-PBS（30-50µl），37 ℃，30min PBS洗，3次 SABC工作液（即用型）25µl，37 ℃，30min PBS洗，3次 DAB显色： DAB显色工作液配制（现配）：用三蒸馏水稀释DAB显色液（20倍），混匀后加至96孔板（25-30µl/孔），镜下控制，以蒸馏水终止反应。 观察结果 塔摩乱混赊邦潭证指对阮掏屡纶休踏澈雏蟹夸诱阁沿便愁楚拷埋互颧尺座凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 实验结果 缺糖前 HeLa 细胞 恐旁拒盖职正结盅滚掸梗莫效睹柳腥稀淄穗腔遭亏错尚揍习辊德采突灭驻凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物的检测 缺糖 24h HeLa细胞 矢蛀声涟替夺镀孜橱叉外保特姚妨矩囤甭贿拄需韭泊晋原蠢偿消辐工衬置凋亡相关基因Bax表达产物的检测凋亡相关基因Bax表达产物