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天麻苷的提取工艺与分离纯化摘要：目的：研究天麻中活性成分天麻苷的提取工艺与AB-8大孔吸附树脂分离纯化天麻中天麻苷的工艺条件及参数；方法：用均匀设计实验对天麻苷的提取工艺进行优选，选用U9(96)进行均匀设计实验以出膏率及天麻苷的提取率为指标，考察乙醇浓度、液固比、提取时间及提取次数对天麻苷提取的影响；而大孔吸附树脂法的分离纯化是以天麻苷的吸附量和洗脱率为考察指标，研究大孔吸附树脂分离纯化的吸附性能和洗脱参数。结果：提取的最佳工艺条件为：加10%乙醇8倍量，提取3次，每次3h；分离纯化是AB-8树脂对天麻苷吸附容量为7.32mg·g-1，洗脱率为96.77％。结论：均匀设计法是优化多因素与多水平实验的有力工具；AB-8大孔吸附树脂法分离纯化天麻中天麻苷是可行的。关键词：天麻苷；提取工艺；均匀设计；分离纯化；大孔吸附树脂；天麻为兰科植物天麻（GastrodiaelataBl.）的干燥块茎，为常用名贵中药，具有平肝熄风、止痉之功效，内含苷类、酚类、甾醇、有机酸类及糖类等多种成分[1]。现代药理实验证明，天麻具有镇痛、抗炎、抗衰老、改善学习记忆力、抗惊厥以及影响心血管系统，增加心、脑血流量，降低血管阻力舒张外周血管作用[2-3]。天麻苷、赤箭苷、胡萝卜苷等苷类成分具有抗惊厥、镇痛催眠、镇痛、改善心血管系统、延缓衰老、降低血压和外周血管阻力，增加动脉血管中血流惯性，以及中央和外周动脉血管的顺应性等药理活性[4-5]。因此，总苷类尤其是天麻苷是天麻的重要活性成分。均匀设计法优选天麻中天麻苷的提取工艺目前，天麻制剂被广泛用于治疗头晕目眩、小儿惊风、癫痫、肢体麻木及半身不遂等症，并对老年性痴呆症有一定的疗效，常用作脑保健药物。基于天麻制剂的广泛应用，筛选天麻中的天麻苷成分的最佳提取工艺具有重要的经济价值和实用价值。均匀设计作为一种以少量实验处理多因素多水平的方法，近年来得到广泛的应用[6-7]。本实验采用均匀设计法安排实验，选取了乙醇浓度、提取时间、液固比、提取次数4个因素，优选出合理的提取工艺，并对其结论进行了验证，为生产工艺参数的选择提供实验数据。1实验部分1.1仪器、试剂与材料Waters高效液相色谱仪(W2695Separations Module、W2996Photodiode Array Detector)；751紫外分光光度计；R-201旋转蒸发仪；恒温水浴锅；真空干燥箱；电子天平；DPS统计软件。天麻苷对照品；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯；水为二次蒸馏水。天麻经鉴定为兰科植物天麻GastrodiaelataB1.的干燥块茎。1.2提取方法取干燥并粉碎过60目筛的天麻，精密称定，置圆底烧瓶中，按均匀设计安排的各实验条件加入一定浓度、一定体积的乙醇，回流提取规定的次数及时间，过滤，合并滤液，用旋转蒸发仪减压回收乙醇，使滤液成膏，计算得膏率。并采用紫外分光光度法及HPLC法测定天麻苷含量。1.3HPLC测定天麻苷的含量[8-9]1.3.1色谱条件色谱柱：SymmetryC18柱(3.9mm×15cm)，流动相：乙腈一水(2:98)，流速：0.8mL/min，检测波长：220 nm，柱温：250C。1.3.2标准曲线的制备精密称取天麻苷对照品，加乙腈-水(2:98)溶解，制成浓度为0.24mg/mL天麻苷对照品溶液。再分别精密吸取溶液1．0，2．0，3．0，4.0，5.0 mL，分别置10 mL量瓶中，加乙腈-水稀释(2:98)至刻度，摇匀，即得。精密吸取上述溶液10μL止，分别注人高效液相色谱仪中，在上述的色谱条件下进样分析进样，以天麻苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，其回归方程为：Y=3×106X-32276，r=0.999 9,结果表明：天麻苷在0.024～0.12 mg/mL范围内呈良好线性关系。色谱图见图1。1.3.3精密度实验精密吸取天麻苷对照品溶液(0.048 mg/mL)，连续5次进样10μL，测定峰面积，RSD为0.04％。1.3.4回收率实验取已测得含量的样品溶液5份，分别与对照品标准溶液等量混合，依法测定，得平均回收率99.76％，RSD为1.66％。1.3.5样品测定取提取的浓缩膏体适量，精密称定，用乙腈-水(2:98)少许溶解，转移于10mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜0.45μm)过滤。取10μL供HPLC分析。色谱图见图2。2方法与结果2.1提取溶剂的选择天麻苷属于一种酚苷，分子量较小，极性较大。按常规水煎煮提取即可，但据文献报道[10]，用乙醇溶液进行提取，有效成分提取更完全，更彻底。本实验考虑实际生产的需要，故选择不同浓度的乙醇作为提取溶剂。2.2提取条件对天麻中活性成分天麻苷的影响根据预实验结果，选择对提取率影响较大的乙醇浓度(X1)、液固比(X2)、提取时间(X3)及提取次数(X4)为