赤芍总苷对人黑色素瘤A375细胞迁移及侵袭活性的影响.pdfVIP

· 318 · 广东医学 2012年2月第 33卷第3期 GuangdongMedicalJournal Feb．2012，Vo1．33，No．3 赤芍总苷对人黑色素瘤 A375细胞迁移及 侵袭活性的影响 王亚珍 ，吕品田 ，王凤红 ，王辰英 河北省人民医院 保健处，肿瘤科，医院办公室(石家庄 050051) 摘【要】 目的 观察赤芍总苷(totalpaeonyglucosides，TPG)对人黑色素瘤A375细胞迁移和侵袭能力的影响， 探讨TPG抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的相关机制。方法 体外培养黑色素瘤细胞，分别加入5、15、20、25mg／L TPG，细胞划痕实验测定迁移力；Transwell小室侵袭实验测定侵袭活性。RT—PCR和Westernbolt方法检测黑色素 瘤细胞MMP一2、MMP一9和TIMP一2mRNA和蛋白的表达。结果 TPG能显著抑制黑色素瘤A375细胞的迁移 和侵袭，与对照组比较，TPG组细胞MMP一2、MMP一9mRNA和蛋白表达明显下降，TIMP一2mRNA和蛋白表达显 著上升(P0．01)。结论 TPG可通过下调MMP一2、MMP一9，上调TIMP一2，调节MMP—TIMP平衡，发挥抑制 黑色素瘤细胞迁移和侵袭的作用。 【关键词】 赤芍总苷；黑色素瘤细胞；迁移；侵袭 赤芍为常用中药，来源于毛茛科植物芍药或川赤 1．3 方 法 芍的干燥根，具有清热凉血、散瘀止痛等功效 。赤芍 1．3．1 细胞划痕实验 将人黑色素瘤 A375细胞以含 总苷 (totalpaeonyglucosides，TPG)为赤芍主要有效成 10％胎牛血清的RPMI1640常规培养，细胞生长至 分 ，近年关于TPG的研究多集中于在肝 、心脑血管 100％汇合后 ，用无菌吸头在玻片上划痕。PBS洗净被 方面 。虽然TPG对肿瘤的作用已被关注 ，然而 刮下的细胞后 ，每孔加纤连蛋白，后加入 5、15、20、25 至今尚未见到TPG对癌细胞迁移及侵袭能力产生影 mg／LTPG，对照组加入等量生理盐水，孵育48h之后 ， 响的报道。2010年3—8月本实验以人黑色素瘤A375 镜下观察细胞生长情况。任意取5个视野。 细胞为研究对象，观察TPG对黑色素瘤 A375细胞迁 1．3．2 Transwell小室侵袭实验 采用 24孔板 Tran— 移及侵袭能力的影响及对细胞内金属基质蛋 白酶 一2 swell小室进行，包被有胶原基质的Millipore滤膜孔径 为8txm。将 5、15、20、25mg／LTPG，处理的人黑色素 (MMP一2)、金属基质蛋白酶 一9(MMP一9)和金属基 质蛋白酶组织抑制剂 一2(TIMP一2)表达的影响，探讨 瘤细胞用0．25％胰蛋白酶消化后 ，分别以10个／孔接 TPG抑制黑色素瘤的分子机制。 种于上层小室 ，下室加入 10％FBS培养液，培养 16h， 取出滤膜用棉拭子擦掉正面的细胞，膜用甲醇固定 1O 1 材料与方法 min，高倍镜下随机计数 5个视野中的细胞数，取平 1．1 材料 人黑色素瘤 A375细胞株，购 自中国科学 均值。 院上海细胞研究所。TPG由河北医科大学药学院惠 1．3．3 RT—PCR方法测定 MMP一2、MMP一9及 TIMP一2 赠，纯度 95％。 mRNA的表达 人黑色素瘤细胞加人25mg／LTPG孵 1．2 主要试剂 MMP一2、MMP一9、TIMP一2、GAPDH 育48h，收集细胞，常规方法提取RNA，按RT—PCR试 一 抗购 自SantaCruz公司；RT—PCR试剂盒购 自大连 剂盒要求进行反转录反应和PCR扩增 目的片段，PCR 宝生物技术公司；MMP一2、MMP一9、TIMP一2、GAPDH