光学显微镜技术.pdf

第二部分光学显微镜技术 第一章 概述 第一节 显微镜的作用 人眼对微观世界观察的局限性 光学显微镜是人类探索微观世界的光学精密仪器 光学显微镜的发展在很大程度上决定了人们对生命现 象的认识 第二节 显微镜的类型 根据照明源的性质 一、光学显微镜：利用可见光（或紫外光）为照明源，一 般有单式及复式显微镜两类。 复式显微镜可分为： 1. 普通型：常规使用。 2. 特种型：如荧光、相衬显微镜等；供专门观察和研究。 3. 高级型：万能显微镜。 4. 共焦激光扫描显微镜（Confocal）。 第三节光学显微镜的发展简史 1625年法布尔提出显微镜的概念 1610年伽利略制造出具有物镜、目镜及镜筒的复式显微镜 1611年开普勒说明了显微镜的原理 1665年虎克制造出放大140倍的显微镜，提出“Cell”的概念 1684年惠更斯制造出双透镜目镜：惠更斯目镜 19世纪阿贝提出显微镜的完整理论 1902年艾夫斯建立了双目镜系统 1935年泽尼克发现了相衬原理，并因此获得诺贝尔奖 20世纪60年代微分干涉衬显微镜问世 20世纪80年代共焦激光扫描显微镜开始应用 第四节显微镜的基本光学原理 一、折射与折射率 光线的折射现象 物质的折射率 二、透镜的性能 凸透镜可以会聚光线 凹透镜可以发散光线 三、透镜的成像质量 象差：是指透镜所形成的象与理想象在形状、颜色等方面 存在差异。 色差：由于不同的颜色光线折射率差异而形成的象差。 色差的校正（1）采用单色光为光源。 （2）利用透镜的性质。 四、显微镜的成象（几何成象）原理 利用凸透镜成象原理 物镜成象：利用物体在凸透镜一倍焦距以外二倍焦距以内，成倒立的放 大的实象。 目镜成象：是利用物体在凸透镜一倍焦距以内，成正立的放大的虚象。 显微镜成象原理： 第二章、显微镜的主要光学技术参数 第一节 数值孔径（Numerical Aperture ， NA ） 数值孔径（NA）是物镜前透镜与被检物体间介质的折射率（η）和孔径角 （u）半数正弦的乘积。 用公式表示：NA= η sin u/2 数值孔径代表了物镜或聚光镜光通量的大小，是衡量物镜或聚光镜性能高低 的重要指标。 同样放大倍数下，数值孔径越大，物镜的性能越高。 干燥系物镜 NA1,一般为0.05-0.95 油浸系物镜一般 NA1,最大为1.4 聚光镜的数值孔径大小，可通过孔径光阑进行调解，一般为0.05-1.4 数值孔径（NA）是显微镜中最重要的技术参数,它几乎决定和影响了其它技术 参数。它与分辨率成正比；与有效放大率成正比；与焦深成反比；NA的平方 与图象亮度成正比 NA值增大 视场宽度与工作距离都会相应变小 第二节 分辩率（Resolving power ） 分辨率—是衡量显微镜性能的另一个重要技术参数。往往用最 小分辨距离来表示。 在显微镜的设计中确定，当最小点的衍射斑象的中心刚好落在 另一个衍射斑象的边缘，则认为两物点象刚刚能够被分辨；这 就是可以分辨的最小距离。 最小分辨距离：δ=λ/NA 其中λ为照射光波长，NA为显微镜物镜的数值孔径 可见显微镜的最小分辨距离是有限的。光学显微镜的最小分辨 距离，理论上看约为0.3微米左右。 第三节 有效放大率（Magnification） 总放大率 M=Mob （物镜放大率）×Moc （目镜放大率） Mob=△/F1 △为标准镜筒长度160毫米；F1为物镜的焦距 Moc=250/F2 250为人的明视距离，单位为毫米 F2为目镜的焦距 显微镜的“有效放大率” ，是在标准筒长下，所使用的物镜数值孔径的500- 1000倍。 物镜在显微镜中的重要作用！