病例报道用靶向二代测序对一例多病灶非小细胞肺癌进行分子诊断.docVIP

病例报道：用靶向二代测序对一例多病灶非小细胞肺癌进行分子诊断 Willemina R. R. Geurts-Giele · Albertina W. Dirkx-van der Velden · Natascha M. M. T. Bartalits ·Leon C. Verhoog · Wessel E. J. J. Hanselaar · Winand N. M. Dinjens Virchows Arch (2013) 462:249–254 DOI 10.1007/s00428-012-1346-4 摘要 非小细胞肺癌（NSCLC）的组织学和分子亚型对于预测这些病人的存活和对药物的反应是很重要的。高达8%的NSCLC都是多病灶的，这些肿瘤病灶往往是克隆关联的。然而，多重病灶也可以代表不同的原位瘤，与预后和治疗效果。我们描述了一个多病灶的NSCLC病人，从两处单独的病灶获得组织。用常规传统的分子方法来检测两处病灶的克隆关系。此外，用Ion Torrent个体化基因组测序仪（PGM）进行靶向二代测序，来探究这个相对新技术的准确性和额外价值。该病人的两处肿瘤具有不同的激活的表皮生长因子受体（EGFR）突变， EGFR扩增状态、TP53突变状态和杂合性丢失状态。PGM结果证实了传统方法检测到的所有突变，同时在一个肿瘤中检测到了ATM的一个重要性未知的变异体。该病人的NSCLC多病灶代表两个无关的原位瘤。我们的结果表明多病灶的NSCLC应该被看作潜在的多原位瘤。由于活化的EGFR突变的出现有重要的治疗效果，所以应该在出现的所有肿瘤病灶中检测EGFR。在目前的病例中，用PGM进行的靶向二代测序是精确的，并且和传统的分子检测方法具有可比性。然而，PGM应用于常规的病例分子诊断学中需要用大量病例确认。 关键词 多病灶NSCLC 二代测序 PGM 介绍 非小细胞肺癌（NSCLC）作为肺癌最常见的类型，是癌症死亡率的主要原因。NSCLC的组织和分子亚型对预测生存期和药物效果是很重要的。当NSCLC病人带有激活的表皮生长因子受体（EGFR）突变时用酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）进行治疗比用传统的化疗方法具有更长的无进展生存期。相反地，当NSCLC病人没有EGFR突变时传统化疗方法比TKI治疗效果更好。 高达8%的NSCLC是多病灶的。这些肿瘤是同步发生（同时检测到）或者非同步发生（间隔一段时间后检测到）。多病灶肺部肿瘤可能是克隆相关的，也有可能代表多个不相关的原位瘤。之前研究表明7—64%的多病灶肺部肿瘤都是不相关的原位癌。范围如此大是因为包括了不同的肺癌亚型和包括或者排除非同步肿瘤。此外，结合不同的分子技术检测失去异质性的肿瘤之间的克隆关系，EGFR、KRAS和TP53的突变情况。从多个原位瘤中区分克隆相关的肿瘤对于个体病人的恰当治疗是最重要的。已报道带有多病灶不同克隆的肿瘤病人可能比多病灶克隆相关的肿瘤病人具有更好的治疗效果。单个原位NSCLC的多病灶性可能预示着病变部位的扩散或恶性可能性。 本研究中，我们描述了一个同步发生的多病灶NSCLC病人。用传统的分子方法阐明了这些病灶是否是克隆相关的问题。并且做了靶向二代测序，以此来验证这个相对较新的技术在肿瘤克隆关系的诊断上的准确性和额外价值。 临床史 研究中所指的病人在69岁时被诊断为患有多病灶肺癌。该病人在出现胸口疼痛和体重减轻之前是个健康的烟民（每年45包）。通过CT扫描，我们发现三个胸膜下的，小节下的病变；两处在左上肺叶，一处在正中肺叶。通过CT介导的细胞活检，我们没能成功的得到足够的肿瘤样本，所以她被安排进行电视胸腔镜。对位于左肺顶部的两处肿瘤实施了局部切除，一个直径15mm的肿瘤位于腹面（肿瘤1），另一个直径17mm的肿瘤位于背面（肿瘤2）。检查胸膜腔时，在脏胸膜和壁胸膜都发现了扩散小节图像。切除右肺部的肿瘤是不可能的。病理结果表明左肺的两处肿瘤病灶都是腺癌和TTF1阳性的（图. 1b)，表明他们均来源于肺。病人的病情被定级为pT4N0M1 NSCLC。分子分析结果表明两处肿瘤病灶具有不同的EGFR 19外显子缺失，病人开始服用吉非替尼（TKI）。自开始服用吉非替尼起，病人已坚持服用32个月，并且效果很好。手术后30个月进行CT扫描，结果显示疾病没有复发。 材料和方法 取5至15片经过HE染色的福尔马林固定石蜡包埋组织切片（4μm），对其中的正常和肿瘤组织进行手动显微切割。按照之前提到的方法，用蛋白酶K和5%的Chelex 100 树脂提取DNA。 依照标准操作方法，分别用鼠单克隆抗体Do-7（Dako，Glostrup，Denmark）和SPT24（Monosan, Uden, The Netherlands）完成P53和TTF-1的免疫组织化学染色。为了明确