目前对核骨架.PDF

核基质概论 细胞核骨架是存在于真核细胞核内的以蛋白成分为主的纤维网架体系。目前对核骨架的概念有两 种理解，狭义的核骨架仅指核内基质(inner nuclear matrix，inner nuclearskeleton)，即细胞核内除 核膜、核纤层、染色质、核仁和核孔复合体以外的以纤维蛋白成分为主的纤维网架体系；广义的 核骨架包括核基质、核纤层和核孔复合体。 长期以来，对细胞核的研究主要集中于染色质，核仁和核膜，尤其是注重对DNA 、RNA 、组蛋 白和核酸酶的研究。核骨架曾长期被人们所忽视，直到70年代中期，Berezney 和Coffey 等(1974) 才首次将核骨架(nuclear matrix)作为细胞核内独立的结构体系进行研究，用非离子去垢剂、核酸 酶与高盐缓冲液对大鼠肝细胞进行处理，当核膜、染色质与核仁被抽提后，发现核内仍存留有一 个以纤维蛋白成分为主的网架结构。此后，真核细胞中核骨架的客观存在相继为其他实验室所证 实，并发现核骨架与DNA 复制、RNA 转录和加工、染色体组装及病毒复制等一些重要的生命活 动有关( 图9-26) 。 (一)形态结构 近年来，核骨架的研究取得很大进展，成为细胞 生物学研究的一个新的生长点。细胞核内物质密度较大，且有大量染色质纤维，直接在原位研究 核骨架的形态结构及成分相当困难。在核骨架研究中，一般首先分离核骨架，然后研究其结构成 分及功能。最早是Coffey 等用非离子去垢剂、核酸酶与高盐缓冲液(2mol ／L NaCl)处理细胞核， 分离核骨架。值得一提的是Penman 等建立的细胞分级抽提方法。先用非离子去垢剂处理细胞， 溶解膜结构系统，胞质中可溶性成分随之流失，主要存留细胞骨架体系。再用 Tween 40和脱氧 胆酸钠处理，胞质中的微管、微丝与一些蛋白结构被溶去，胞质中只有中间纤维网能完好存留。 然后用核酸酶与0.25mol ／L 硫酸铵处理，染色质中DNA 、RNA 和组蛋白被抽提，最终核内呈现 一个精细发达的核骨架网络，结合非树脂包埋-去包埋剂电镜制样方法，可清晰地显示核骨架-核 纤层-中间纤维结构体系。此后，又有更接近于生理条件的核骨架制备方法出现，如用3，5-二碘 水 杨 酸 锂 (LIS) 处 理 细 胞 核 来 分 离 核 骨 架 。 核骨架的形态结构根据不同报道有所差异，Berezney 与 Coffey(1974)等采用高盐溶液2mol ／L NaCl 处理，在核内显示一个以纤维蛋白成分为主的核基质(nuclear matrix) ；Pen-man 等采用比较 温和的细胞分级抽提方法，在核内显示出精细发达的核骨架纤维网络，核骨架纤维直径为3～ 30nm，估计单丝直径约3～4nm，粗纤维可能是单纤维的复合体；也有报道认为核骨架核心纤维 (core filament)的直径为9nm 。核仁与染色质网络于核骨架纤维网络中，核内骨架与核纤层有丰富 的纤维联络，构成统一的核骨架网络( 图9 －27) 。 (二)成分 核骨架的成分比较复杂，主要成分是纤维蛋白，并含有少量RNA 。RNA 的含量虽然很少，但它 对于维持核骨架三维网络结构的完整性是必要的。分离的核骨架中常含有少量 DNA ，一般认为 这是一种功能性结合。核骨架不象胞质骨架，诸如微丝、微管和中间纤维那样，由非常专一的蛋 白成分组成，不同类型细胞核骨架成分可能有较大差别，目前已测定的核骨架蛋白有数十种，这 些蛋白可以分为两类：一类是各种类型的细胞共有的；另一类则与细胞类型及分化程度相关。目 前关于核骨架蛋白的确切组分尚未取得共识，这也是核骨架研究中争议较多之处。分离鉴定功能 性的核骨架蛋白是目前核骨架研究一个重要领域，比较确定的成分有：(1)DNA 拓扑异构酶Ⅱ： 是间期细胞核骨架和分裂期染色体骨架的重要成分之一；(2)nuclearmatrin ：有matrinD ，E ，F ， G 和4等，定位于核基质，且呈现纤维颗粒样分布，很可能是核基质上DNA-loop 的结合蛋白； (3)Nuc2+蛋白：Nuc2+蛋白是S．pombe(一种酿酒用的酵母) 的Nuc2+基因编码的蛋白，分子量为 76kD 。Nuc2+基因在有丝分裂染色体分离过程中起重要作用，Nuc2+蛋白存在于核基质以及染色 体骨架(chromosome scaffold) 组分当中，而且与富含 AT 的 DNA 序列有特异的亲和性； (4)ARBP(attac