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第四节 核酸分子杂交
第四节 核酸的分子杂交Nucleic Acid Hybridization;核酸分子杂交:
概念:具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下,按碱基配对原则形成双链的过程。;;Content of Table;一、核酸分子杂交技术的原理; 应 用:
1)检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系;
2)用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、拷贝数及表达丰度。 ;二、核酸探针的制备;探针的制备方法;探针的分类:
据制备方法及核酸性质不同,可分为:
基因组DNA探针
cDNA探针
RNA探针
寡核苷酸探针;合成寡核苷酸探针注意原则:;三、核酸探针的标记;1、标记的种类;一个理想的标记物:
1)标记前后探针的基本结构、化学性质相同;
2)特异性强、本底低、重复性好;
3)操作简单、节时;
4)安全、无环境污染。;2、探针的标记方法;缺口平移法的原理;随机引物标记法原理;末端标记法原理;生物素光照??记法;四、核酸分子杂交技术; 此技术由Southern 1975年首先设计。被检测对象为DNA。 ;带有DNA片段的凝胶;(二)Northern印迹杂交;(三)Western印迹杂交;(四)斑点印迹杂交和狭线印迹杂交;(五)原位杂交in situ hybridization
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