现代分析测试技术综合复习-2011-2012.docVIP

现代分析测试技术 ☆常用的评价一个分析技术和方法的特性参数（performance characteristic）： 精密度Precision 准确度Accuracy 灵敏度Sensitivity 检测限Detection Limit 定量限Quantitation Limit 线性范围Linearity Limit 动态范围Dynamic Range 选择性Selectivity 把上述各参数的定义搞清楚。 变性梯度凝胶电泳的基本原理是什么？ 答：主要是利用梯度变性胶来分离DNA片段。电泳开始时,DNA在胶中的迁移速率仅与分子大小有关, 而一旦DNA泳动到某一点时, 即到达该DNA变性浓度位置时, 使得DNA双链开始分开,从而大大降低了迁移速率。由于不同的DNA片段的碱基组成有差异, 使得其变性条件产生差异, 从而在凝胶上形成不同的条带。 变性梯度凝胶电泳的优缺点是什么？ 答：①突变检出率高。 ②检测片段可达1kb, 尤其适于100bp～ 500bp 的片段。 ③DGGE对肿瘤的突变检测有困难, 尤其是实体瘤。 ④加样量小。 ⑤重复性好。 ⑥操作简便, 快速。 ⑦该法的缺点是一般不能确定突变位置, 最终还得依赖于DNA 测序。 EC-STM）的工作原理是基于量子力学中的隧道效应，即当一个非常尖的金属针尖(理想情况下认为只有一个原子的曲率半径)靠近导电样品到0．4～ 1 nm 时，它们的电子波函数会在一定程度上交叠。这时在一定的外电场(偏压)作用下，电子会穿过针尖／样品之间的位垒从一端流向另一端，形成隧道电流。在偏压一定的情况下，隧道电流与两电极间的距离为指数关系，针尖和样品之间距离的微小变化将导致隧道电流呈现指数形式变化，如果控制隧道电流保持恒定，针尖将在反馈的控制下随电极表面的形貌而起伏。 AFM）在工作原理上与STM 完全不同，它将一个对微弱力极其敏感的微悬臂一端固定，另一端有一个微小的针尖，针尖与样品表面轻轻接触。由于针尖尖端的原子与样品表面原子之间存在极其微弱的排斥力，若控制这种力的恒定，在扫描过程中，带有针尖的微悬臂将对应于针尖与样品表面原子间作用力的等位面而在垂直于样品的表面方向上起伏。利用光学检测方法则可测得微悬臂对应于扫描各点的位置变化。 与ECSTM 技术相比，由于主要利用的是针尖和样品之间的相互作用力，ECAFM 在固液界面的加工对象从导电材料成功拓展到不导电材料上。因此与STM 的加工对象相比，AFM 应用的对象范围要更为广泛，但是其分辨率较低，一般为几十个纳米至亚微米的尺度上。 在扫描操作上和STM 都是通过移动探针来扫描基底表面，但在工作原理和应用范围上二者有很大的区别。SECM 的基本原理是利用电化学方法在超微盘电极(探针)表面造成溶液中电活性物质的氧化或还原，由于电流与探针／基底之间的距离以及基底的表面性质存在特定的关系。通过这些关系可以研究半导体、导体和绝缘体的表面形貌，或化学(生物)活性的微区分布，以及微区化学反应和生物过程。由于使用微电极作为探针，因而具有化学选择性。 相对STM 和AFM 方法，利用SECM 需要注意的是，不论是沉积或刻蚀，都不可能忽略了离子的侧向扩散，显然刻蚀时间的增长使得离子侧向扩散更远，沉积或刻蚀的精度越差。另外SECM 微圆盘形针尖的形状和尺寸，也使得相对于STM 和AFM而言它的加工精度很难达到纳米尺度，一般条件下为(亚)微米。 X射线光电子能谱的基本原理： XPS 基本原理是利用X 射线辐照样品，在样品表面发生光电效应，产生光电子，如图1。通过对出射光电子能量分布分析，得到电子结合能的分布信息，进而实现对表面元素组成及价态分析。 物质受光子激发而发射出电子的现象称为光电效应。当用一束光子照射样品时，x射线与物质相互作用，物质吸收X射线的能量并使原子中内层电子脱离原子成为自由电子，这些激发出来的电子称为光电子。光电子数目按其动能大小的分布成为光电子能谱，它适合于研究元素内壳层电子状态。 二、X射线光电子能谱图 元素的特征峰： 样品中各元素的原子，在X射线的作用下，激发出各种轨道上的电子成为光电子。所得到的光电子能谱图将会有多个电子谱峰，通常采用该元素被激发电子所在的能级来标记这些光电子。例如，从K层激发出来的光电子称为1s电子，从L层激发出来的分别标记为2S、2P1/2、2P3/2。依此类推。如图所示为Ag的x射线光电子能谱。横坐标表示电子的结合能(有时候以光电子的动能表示)，纵坐标为光电子强度。由于采用MgK。为激发源，Ag原子的第一、第二壳层(K层和I‘层)的电子结合能大于Mg尺Qlt z的能量，故不能被激发，只能激发外面壳层(M和N层)的电子。它们被分别记为Ag3S、Ag3 P1/2、Ag3 P3/2、Ag3d 3/2、Ag 3d