紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠含量.docVIP

紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量 实验目的 进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV2550的操作。 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，其使用量一般在0.1%左右。 苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。 仪器和试剂 紫外可见分光光度计 UV2550（日本岛津），1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。 NaOH溶液（0.1mol/L） 苯甲酸钠标准溶液的配制 苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃ 苯甲酸钠标准溶液（100.0mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L和10.0mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。 市售饮料的配制 准确移取市售饮料0.5ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，加入0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，用蒸馏水稀释定容。 蒸馏水 实验步骤 开机 打开计算机，打印机。 打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击“Connect”与仪器联机，仪器开始自检，通过后按“OK”。 吸收光谱的测定 选择“Window”→“Spectrum”，打开光谱模块。 选择“Edit”→“Method”，设定波长范围（从大到小），扫描速度（Fast），采样间隔（1.0），扫描方式（Single），Instrument Parameters（Absorbence）。 样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Baseline”，启动基线校正，点击确定。 注：在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。(4) 参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点击按键条中的“Start”，测定紫外可见吸收光谱。 （5）扫描完成后，在弹出的新数据采集对话框中输入样品名，点击确定。 （6）图谱保存：选择“File” →“Save as”，在对话框顶部的保存位置中选择适当的路径，输入文件名，保存类型中选择Spc，点击“保存”。 （7）最大吸收峰：选择“Operations” →“Peak Pick”，找到最大吸收峰对应的波长。 标准曲线法测定待测样品的浓度 选择“Window”→“Photometric”，打开测量光度模块。 选择“Edit”→“Method”，设置合适的波长（“Wavelength”），如225nm，点击“Add”，点击选定的Wavelength，根据提示，点击next，next，方法，设定保存路径，点击“保存”。 样品池和空白池均放上2.5mL缓冲溶液，点击光度计按键条中的“Cell blank”，进行背景校正。 标准曲线：在Standard table框里输入Sample ID（从1开始），标准溶液的浓度“Concentration”，输入完毕，将光标移到WL225下。在样品池中由稀到浓，依次放入系列标准溶液，点击按键条中的“Read std”，依次读出标准系列溶液的吸光度值。（浓度为0 的空白液可先按“自动归零”后再读数） 点击“Graph” →“Standard Curve Statistics” →“Equation”，“Correlation Coefficient”， 得到标准曲线的方程和相关系数。 同样，样品池中放入待测溶液，在Sample table框里框里输入Sample ID，点击按键条中的“Read std”，读出待测溶液的浓度和对应的吸光度值。 4. 关机 点击菜单中“Instrument” →“configure” →“maintenance”，进入界面后点击“D2”、“W1”，关闭氘灯和钨灯，再点击按键条中 “Disconnect”，然后关仪器软件，最后关电脑和仪器电源。 数据处理 苯甲酸钠紫外-可见吸收光谱的测定，并找出最大吸收峰波长。 苯甲酸钠标准曲线的测定，以及曲线方程、相关系数的测定。 样品中苯甲酸钠含量的测定。 注意事项 试样