4.3《酵母细胞的固定化》）课件 严晚英.pptVIP

* 酵母细胞的固定化 酶制剂特点 ①天然酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活 ②溶液中酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本 ③反应后，酶会混在产物中，影响产品质量，难以在工业生产中广泛应用 （二）固定化酶 固定化酶是指限制或固定于特定空间位置的酶，具体来说，是指经物理或化学方法处理，使酶变成不易随水流失即运动受到限制，而又能发挥催化作用的酶制剂 （三）固定化细胞 将细胞限制或定位于特定空间位置的方法称为细胞固定化技术 被限制或定位于特定空间位置的细胞称为固定化细胞 固定化技术： 固定化细胞： 固定化酶的应用实例 1、高果糖浆 ①生产原料 葡萄糖，葡萄糖是由淀粉转化而来 是以酶法糖化淀粉所得的糖化液，经葡萄糖异构酶的异构作用，将其中一部分葡萄糖异构成果糖，由葡萄糖和果糖而组成的一种混合糖糖浆 ②生产机理 ③生产流程 含淀粉的浆液 α-淀粉酶 糊精 糖化酶 葡萄糖 葡萄糖异构酶 葡萄糖的异构化 42%～45%转化成果糖 果葡糖浆 果糖和葡萄糖分离 葡萄糖再次异构化 反复多次 果糖含量70%～90% 高果糖浆 固定后的酶或细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降由于大分子物质难以自由通过细胞膜，因此固定化细胞的应用也受到限制 成本低、操作容易、对酶活性的影响更小、可以催化一系列的反应、容易回收 固定化细胞 一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到的 酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上的酶还可以被反复利用 固定化酶 对环境条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量 催化效率高，低耗能、低污染等 直接使用酶 不足 优点 类型 （四）直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点 ②生产优点 反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量 （五）酶和细胞固定化方法 1、物理吸附法： 将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性碳、多孔玻璃等 2、包埋法 ①定义：将酶包裹在多孔的载体中，包埋成格子型或包埋成微胶囊型 ②载体：明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺 3、化学结合法： ①定义：将酶分子相互结合，或将其结合到纤维素、琼脂糖，离子交换树脂等载体上的固定方式 （六）酶和细胞固定方法的选择 ①酶适合采用化学结合和物理吸附法固定 ②细胞适合采用包埋法固定 1、方法 2、原因 ①细胞个大，酶分子很小 ②个体大的细胞难以被吸附或结合而个小的酶容易从包埋的材料中漏出 二、实验操作 （一）方法 1、包埋法固定化细胞 2、海藻酸钠作载体包埋酵母细胞 （二）制备固定化酵母细胞 1、酵母细胞的活化 ① 过程 称取1g干酵母，放入50ml的小烧杯中，加入蒸馏水10ml。用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右，使其活化 ②注意事项 A、选用的干酵母要具有较强的活性，而且物种单一 B、在缺水状态下，微生物处于休眠状态。活化就是让处于( )的微生物重新恢复正常的生活状态 休眠状态 2、配置物质的量浓度为0.05mol/L的CaCl2溶液 ① 过程 称取无水CaCl2 0.83g，放入200ml的烧杯中，加入150ml的蒸馏水，使其充分溶解，待用 ②注意事项 溶解物质要彻底，勿用自来水溶解，以防自来水中各种离子影响实验结果 3、配制海藻酸钠溶液 称取0.7g海藻酸钠，放入50ml小烧杯中，加入10ml水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10ml ① 过程 ②注意事项 加热时要用 ，或者 反复几次，直到海藻酸钠溶化为止 小火 间断加热 海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量。如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少 4、海藻酸钠溶液和酵母细胞混合 将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入以活化的酵母细胞，进行充分搅拌，再转移至注射器中 ① 过程 ②注意事项 A、溶化好的海藻酸钠溶液必须冷却至室温，否则会因温度过高杀死酵母菌 *