材料试剂和培养基-yzxzcom.DOCVIP

承担单位：福建省农科院农业生物资源研究所 试验设计： 试验项目：产酶芽胞杆菌初筛染色方法的探究 试验人员：刘程程 试验负责：蓝江林 报告日期：2013-06-13 计数月份：2013年06月 研究资格系数 (0.5-1.0) 实验设计系数 （0.9-1.0） 报告得分 总分 实验设计 实验记载 实验分析 实验简报 实验文章 1-20% 21-40% 41-60% 61-80% 81-100% 1%-5% 设计不足，实施错误 6%-10% 设计不全，实验无果 11%-15% 设计可以，实施不全 16%-20% 设计完整，分布实施 21%-25% 实验不全，记载无果 26%-30% 实验不足，记载不全 31%-35% 独立实验，记载不全 36%-40% 分布实验，记载完整 41%-45% 目的明确，实验完成 46%-50% 实验完整，记载清晰 51%-55% 实验系统，结果可信 56%-60% 实验创新，分析清晰 61%-65% 实验创新，结论清晰 66%-70% 实验完整，统计清晰 71%-75% 实验系统，数据可靠 76%-80% 报告完整，文章雏形 81%-85% 结构合理，分析有据 86%-90% 逻辑清晰，统计合理 91%-95% 图表完整，写作流畅 96%-100% 文献完整，发表水平 福建省农业科学院农业生物资源研究所 农业微生物研究中心 电话: 0591 传真: 05911．试验目的 芽胞杆菌（Bacillaceae），细菌的一科，能形成芽孢（内生孢子）的杆菌或球菌。包括芽胞杆菌属、芽孢乳杆菌属、梭菌属、脱硫肠状菌属和芽孢八叠球菌属等。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。近几年发现一些芽胞杆菌已经被“ 公认安全(GRAS)”,在食品和饲料中可以放心使用，饲用酶制剂的研究开发和推广应用，已成为生物技术在饲料工业和养殖应用中的重要领域，酶制剂作为一种新型高效饲料添加剂，为开辟新的饲料资源和降低饲料生产成本提供了行之有效的途径。芽胞杆菌不仅来源广泛，成本较低，而且作为微生态制剂对动物生长无毒无害, 研究其酶活性来生产酶制剂，应用领域遍及轻工业、食品、化工、医药、农业以及能源、环境保护。标准芽胞杆菌酶活性的普查对于研究它以后的具体应用范围和基因组绘制都有很大帮助。 2．试验方法 2.1 材料、试剂和培养基 木聚糖酶：称取1 g木聚糖酶用9 ml水溶解，然后10000 rpm离心10 min取上清液，制备的木聚糖浓度为10%。 植酸酶：称取1 g植酸酶用9 ml水溶解，然后10000 rpm离心10 min取上清液，制备的木聚糖浓度为10%。 脂肪酶：称取1 g植酸酶用9 ml水溶解，然后10000 rpm离心10 min取上清液，制备的木聚糖浓度为10%。 胶体几丁质：称取10.0 g 几丁质细粉加入100mL 浓盐酸中，边加边搅拌，于4℃ 放置24 h，将被盐酸溶解的糊状几丁质转移到研钵中，再加入100 ml 浓盐酸，研磨均匀后4层纱布过滤，滤液中加入500 ml 50% 乙醇，不断搅拌至胶体充分析出，3000 rpm 离心10 min ，用超纯水洗涤沉淀至中性，4 ℃保存备用。 几丁质选择培养基：几丁质10g、酵母提取物.0 g、NaCl 5.0 g、胰蛋白胨10.0 g、琼脂15-20 g、水1000 mLpH 7.0。 木聚糖培养基：木聚糖10 g，琼脂15-20 g琼脂15-20 g琼脂15-20 g琼脂15-20 g15-20 g。 2.2 实验假设 芽孢杆菌几丁质酶初筛时用碘液染色方法可能存在问题，原因有以下几点： ⑴ 有几丁质酶活的菌株很多，但是复筛测酶活时根本没有酶活。 ⑵ 植酸酶在初筛时也能够用碘液染色出现透明圈，但是文献中没有用这种方法的。 ⑶碘液染色会有很多菌株都有透明圈，现象不正常。 出现透明圈的原因： ⑴酶扩散到周围以后，经过酶分解以后产物与碘液形成透明圈。 ⑵ 酶可能与碘液发生反应，出现透明圈。 ⑶可能会是吸附力的问题，经过酶分解以后产物对碘液的吸附能力下降。 2.3 实验方法 以植酸酶的作用为例进行验证。 ⑴植酸酶扩散到周围以后，经过酶分解以后产物与碘液形成透明圈。 植酸酶可以把植酸钙分解为磷酸钙和肌醇，分别检验磷酸和肌醇与碘液反应后会有什么现象。 制备两个平板，一个平板中加磷酸和琼脂，另一个平板中加肌醇和琼脂，分别检验与碘液发生的反应。 ⑵ 酶可能与碘液发生反应，出现透明圈。 验证方法是木聚糖酶、植酸酶、脂肪酶分别都与碘液反应，看是否都与酶有反应，而并不是酶分解后的产物与碘液反应的。 植酸钙+琼脂等冷却后，打孔，然后分别加入等量的植酸酶、木聚糖酶、脂肪酶，反应4 h后加入碘液。 ⑶可能会是吸附