5.1《DNA的粗提取与鉴定》 课件 陈梅桂.pptVIP

DNA的粗提取与鉴定 ;一、基础知识;4、DNA的溶解性;在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。;DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离;8、DNA的鉴定;二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计;动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可;①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜;答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等;讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质;讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？;（四） DNA的析出与鉴定;2、 DNA的鉴??;（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取;2、实验原理;3、实验材料和用具：;4、课前准备鸡血细胞液;②柠檬酸钠作用;讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液中的上清液？;讨论：;②溶解细胞核内的DNA;讨论：加入蒸馏水的目的？;④滤取含DNA的粘稠物;⑤将DNA的粘稠物再溶解;⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液;答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中;取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化;讨论：;答：整个实验共“两次蒸馏水，三次过滤，两次析出，六次搅拌”;过滤时使用的纱布层数与需用滤液或黏稠物有关，第二次要用其滤出的黏稠物有关，所以要使用多层纱布，第一次和第三次均要用其滤液，使用的纱布为1－2层;③两次析出;（2）为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？