150513基因工程第一课时.ppt

第一章 基因工程 红色荧光蛋白 红色荧光蛋白基因 基因表达 把一种生物的基因转入另一种生物体中， 使其产生我们需要的基因产物，或让它获得新的遗传性状，定向改造生物的新技术。 目的基因 转基因生物 一、概念 “剪刀” “运载体” “针线” DNA 20世纪50年代，相继有两个实验室在研究噬菌体宿主 范围时发现： 噬菌体寄生于天然宿主A品系的大肠杆菌 将噬菌体转移于B品系大肠杆菌时不能繁殖 A品系大肠杆菌 B品系大肠杆菌 1962年，arber发现，噬菌体DNA在B品系中，DNA被切割成片段（降解） 1968年，两位科学家从B品系大肠杆菌中发现一种酶----可识别特定的脱氧核苷酸序列，并切割外源DNA分子。 推测这种酶对于大肠杆菌有何作用？ 限制性内切酶对抗外来DNA 细菌细胞 病毒 病毒DNA 限制性内切酶 病毒注入DNA分子 限制性内切酶切割入侵的DNA 切 割 细菌的自我保护系统 限制性内切酶 DNA片断 DNA 该酶的作用位点？ 磷酸二酯键 氢键 DNA的平面模式图 磷酸二酯键 A BamHI GGATCC CCTAGG EcoRI GAATTC CTTAAG AAGCTT TTCGAA HindIII NotI SacI GAGCTC CTCGAG SalI GTCGAC CAGCTG XbaI TCTAGA AGATCT ApaI GGGCCC CCCGGG 部分限制性内切酶识别序列 SmaI AluI AGCT TCGA CCCGGG GGGCCC 限制酶名称 限制酶名称 识别序列 识别序列 回文序列 GCGGCCGC CGCCGGCG Bam HⅠ HindⅡ 平末端 黏性末端 回文序列：一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致 （EcoRI） DNA HindⅢ切割位点 出现概率：1/46 限制酶识别序列的长度 限制酶识别序列的长度一般为 4-8 个碱基，最常见的为 6 个碱基。 当识别序列为 4 个和 6 个碱基时，它们可识别的序列在完全随机的情况下，平均每 256 个和 4096 个碱基中会出现一个识别位点（44=256，46=4096） 各种型号“剪刀” 1967年，世界上有五个实验室几乎同时发现了DNA连接酶，这种酶能够参与DNA裂口的修复。 迄今已从近300种微生物中分离出了约4000种限制酶。 DNA连接酶 连接的部位： 磷酸二酯键 下列片断在DNA连接酶的作用下能连接起来吗？ 平末端与平末端 平末端与粘性末端 粘性末端与粘性末端 √ × 不一定，相同的粘性末端可以连接 ？ 目的基因 受体细胞 运载体 问：运载体具备什么特点才能完成此操作？ 基因很难进入受体细胞中，即使进入也不能进行复制和表达 运载体的特点1： 能进入并在宿主细胞内稳定保存并大量复制； 常用的运载体：质粒、病毒 细菌的质粒：自主复制的双链、闭合、环状DNA分子； 可以在细胞间转移 ？ 重组质粒 DNA连接酶 受体细胞 运载体的特点2： 有限制酶酶切位点 相同限制酶 CTTAA G AATTC G 目的基因 目的基因所在片段 CTTAA G AATTC G CTTAA AATTC G G PSt Ⅰ 运载体的特点3： 有标记基因 2.选择哪种识别序列的限制酶可获得目的基因？ 复习巩固： 1.酶R能识别并切割按蚊X染色体上特定的DNA序列，使X染色体断裂。估计该酶-----------。 3.质粒中哪个基因结构会被破坏？ pBR322质粒结构 标记基因 进行筛选 限制性内切酶 识别序列 外源基因连接 外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活 含氨卞青霉素 含四环素 含四环素