chapter+6-1+毛细管电泳与毛细管电色谱.pptVIP

检测系统 检测系统 在线检测示意图 在线检测示意图 进样系统 毛细管分离通道十分细小，整个柱体积一般只有4~5μL，所需的样品区带只有几纳升。 毛细管电泳的进样方式一般是将毛细管的一端从缓冲液移出，放入试样瓶中，使毛细管直接与样品接触，然后由重力、电场力或其它动力来驱动样品流入管中。进样量可以通过控制驱动力的大小或时间长短来控制。CE进样技术均适用于CEC。 目前有三种方法可以让样品直接进入毛细管： 电动法、压力法和浓差扩散法。 进样方法 (二) 分离柱效与分离度 柱效率 （Efficiency) 选择性 (Selectivity) 分离度 (Resolution) (1)柱效 理论塔板数（Giddings的定义） 假设分子扩散为峰扩展的唯一因素，由Einstein扩散定律 D为扩散系数；t 为迁移时间 (1)柱效 毛细管电泳的柱效方程： 提高分离电压 V，有利于提高理论塔板数 l/L值越大，理论塔板数越大 当电泳与电渗同向时，电泳迁移率越大，理论塔板数越大 (2)选择性 （3）分离度 （三）引起峰展宽的因素 实际上，N理论N实测 （因理论值只考虑分子扩散） 其它因素： 由进样引起的峰加宽。 焦耳热和温度梯度引起的峰加宽。 由溶质与管壁间的相互作用引起的峰加宽。 电分散: 样品与缓冲溶液间电场强度、淌度差异。 由其它因素引起的峰加宽， 如压差引起的抛物线流。 进样 试样导入毛细管柱时，总有一定的试样区带长度。 细内径的毛细管柱时，进样操作的要求更为严格。 一般进样区带控制在柱长的1% 电泳扩散 试样区带中的缓冲溶液浓度或电阻率与毛细管其它地方的浓度或电阻率不相等时，因两个区域电场强度的差异，而引起区带电分散。 μs---μb 峰前展或拖尾？ 焦耳热 细内径（100μm），粗外径的毛细管柱 温度轮廓 ---- 黏度轮廓 ----速度轮廓 毛细管壁对组分的吸附 电泳峰拖尾或变形，甚至消失。 抑制吸附作用常用的方法有： 使用极端pH条件 加入中性盐或两性离子化合物 对毛细管内壁进行涂层处理 需要注意：方法也会抑制或改变电渗流 毛细管电色谱柱技术 毛细管电色谱（CEC）是毛细管电泳与高效液相色谱的有机结合，其基本理论、仪器装置与毛细管电泳大致类似。 最大的不同是毛细管柱引入了色谱固定相，使CEC同时具有CE与HPLC的分离机理，对中性物质和荷电物质都能达到理想的分离效果。 因此毛细管柱是CEC的心脏，制柱技术是CEC的关键。按照固定相不同形式，CEC可分为填充柱、开管柱和整体柱（连续床）。 毛细管电色谱 填充柱毛细管电色谱 基于填充柱的电色谱是各种电泳中最新出现的一种技术。它是利用电渗透驱动极性溶剂通过反相高效液相色谱毛细管柱，利用试样在两相的分配进行分离。 胶束电动毛细管色谱 是在缓冲溶液中加入浓度高于胶束临界浓度的表面活性剂。胶束相在分离中起到了准固定相的作用，电中性的有机化合物按照它们在水相和有机相之间分配系数的差异进行分离。该方法也可用来改善带电有机化合物的分离选择性。 填充柱 填充柱在CEC中应用最广泛，其最大优点是可以利用众多的HPLC固定相，根据化合物与固定相作用不同实现高效分离。 1 入口柱塞; 2 填充部分; 3 出口柱塞; 4 检测窗口; 5 开管部分 填充柱 CEC填充固定相 在成功掌握填充柱制备技术条件下，CEC固定相是影响毛细管填充柱分离选择性、柱效、分离速度的重要因素，也是发展新型CEC分离模式的基础。 应用于HPLC的各种固定相已被应用于CEC的分离分析中，其中以十八烷基键合硅胶固定相(ODS)研究最多，由于CEC是以电驱动流动相，不存在柱压降问题，因而可以采用粒径很小的固定相，以提高柱效。 混合官能团固定相是专门针对CEC研制的新型填料，这一类固定相在硅胶表面同时键合具有反相色谱性能的烷基官能团和具有离子交换性质的磺酸官能团，在很宽的pH范围内都能保持良好的电渗流。 填充柱 CEC填充固定相 开管柱 开管柱CEC是在管壁键合或涂覆固定相，引入色谱分配机理。 优点： 无须烧制柱端塞子，少有气泡产生。 开管柱CEC无涡流扩散，能获得比填充柱CEC更高的柱效。 缺点： 开管毛细管电色谱柱相比是填充柱的1/350，柱容量低，