饲料中总抗坏血酸测定不确定度-邻苯二铵荧光法2.docVIP

? 饲料中总抗坏血酸的测定不确定度-邻苯二胺荧光法 测试方法简述 1.1方法依据 GB/T17816-1999饲料中总抗坏血酸的测定-邻苯二胺荧光法 1.2 方法简述 称取试样若干克于100m L容量瓶中，用偏磷酸一乙酸溶液定容，摇匀，加2g 活性炭，用力振摇1m in，过滤，收集滤液。取10 ml滤液于两个100 mL容量瓶中分别标明“样品”及“样品空白”。于“样品空白”溶液中各加5 mL硼酸一乙酸钠溶液(4.5),混合摇动15 min，用水稀释至100 mL。于“样品”溶液中各加5 mL乙酸钠溶液(4-4)，用水稀释至100 mL,取以上溶液2.0 m L，置于10 ml带盖试管中，为样品管。取抗坏血酸（含量10p g/mL）0. 5, 1.0, 1.5 和2.0 ml-标准系列，置于10 mL带盖试管中，再用水补充至2.0 ml，为标准管。将样品管和标准管在暗室迅速向各管中加人5 mL邻苯二胺溶液(4.6)，振摇混合，在室温下反应35m in,测定荧光强度。标准管绘制标准曲线，计算出样品中抗坏血酸含量。 1.3 计算公式 式中： X——样品抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总量，mg/kg； c——曲线上查得样液中抗坏血酸的含量，ug； n——样品溶液稀释倍数； m——试样质量，g； 不确定度的来源分析及测量数学模型的建立 2.1蜂蜜中还原糖含量测定的不确定度来源包括以下几个方面： （1）样品称量质量引入的不确定度； （2）c值的不确定度； （3）稀释倍数n引入的不确定度： 2.2不确定度数学模型 3 不确定度评定 3.1 样品称量质量引入的不确定度 U(m)　　 　　称取样品质量的不确定度主要来源于天平校准和称量中的重复性。天平校准所引入的不确定度包括天平的线性和分辨率两个主要方面，由于两次称量的质量值在很窄的范围内，所以分辨率的影响可以忽略。天平的线性误差为±0.2 mg，采用矩形分布处理，校准不确定度为： 　　 由于涉及两次独立称量，因此天平称重的不确定度为： 　　m = 5g，则：U（m）=u (m )/m = 0.000034。 3.2 样液中抗坏血酸的含量 c值的不确定度U(c) 3.2.1 配置抗坏血酸标准使用液时所产生的不确定度u1 ( C) 。 抗坏血酸标液配置过程是:准确称取50.0mg 抗坏血酸,溶于50.0mL 容量瓶,此为储备液,取10.0mL ,定容至100.0mL ,此为标准使用液,从100mL标准使用液中取10.0mL 定容至100.0mL ,然后用移液管取0.5mL , 1.0mL , 1.5mL , 2.0mL 到比色管中,并用水补到2.0mL ,此时这四个比色管中标液浓度分别是2.5μg/ mL ,5.0μg/ mL , 7.5μg/ mL , 10.0μg/ mL ,然后再各加5.0mL 邻苯二胺溶液反应后上机测试。 3.2.1.1 称量抗坏血酸引起的不确定度u( m) 天平的线性误差为±0.2 mg，采用矩形分布处理，校准不确定度为： m = 50.0mg，则：U1（m）=u (m )/m = 0.0024。 3.2.1.2 量瓶的不确定度u ( v50)。 校准50ml容量瓶A级（50±0.05ml）按三角形分布： 50ml量瓶的不确定度：u ( v50) =0.02/50=0.0004 同理：100mLA 级容量瓶( 100±0.1mL) 的u 1 = 0.04mL ; u( v100) =0.0004 10mLA 级移液管( 10±0.05mL) 的u1( v10 ) =0.02mL ; u ( v10) =0.002 =0.0021 3.2.2 标准溶液所得的曲线中引起的不确定度u2（c） 表1 工作曲线 标液浓度（x,ug/ml） 荧光强度 2.5 10.21 5 25.98 7.5 42.30 10 56.16 回归曲线方程式为：y=6.167x-4.88 回归标准曲线标准偏差为 ： Y为仪器的响应值，yi为曲线计算值。 则u2（c）=s//c =0.13 综合u1（c）和u2（c）得出： =0.13 C=5.12ug/ml 则U(c)=U1(C)/C=0.025 3.3稀释倍数n引入的不确定度U（n） M =5.3627g 样品溶解到100mL ,从这100mL 中取10mL 再定容至100mL 。然后取2mL 到试管中,再往试管中加5mL 邻苯二胺溶液,上机测量。 100mLA 级容量瓶( 100±0.1mL) 的u 1 = 0.04mL ; u( v100) =0.0004 10mLA 级移液管( 10±0.05mL) 的u1( v10 ) =0.02mL ; u ( v10