圆锥小麦ramosa2的克隆及其重组蛋白的DNA结合特性-中国农业科学.PDFVIP

中国农业科学 2011,44(3):439-446 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.03.001 圆锥小麦 ramosa2 的克隆及其重组蛋白的 DNA结合特性分析 1 1 1,2 1,2 唐如春 ,杨宇衡 ,范三红 ,郭蔼光 1 2 ( 西北农林科技大学生命科学学院，陕西杨凌 712100 ； 陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌 712100) 摘要：【目的】从四倍体圆锥小麦中克隆ramosa2(TtRa2)，分析其序列特征、组织表达特异性和体外活性， 为阐明 ramosa2 与麦类作物穗形态建成关系奠定基础。【方法】利用半定量 RT-PCR 分析ramosa2 在不同组织中的 表达水平，将其重组到pET-21a-MBP载体并在T7 Express菌株中诱导表达。利用Amylose亲和层析柱纯化重组蛋 白，通过凝胶阻滞试验对其DNA特异结合能力进行鉴定。【结果】TtRA2含有LOB和RA2 结构域，属于Ⅰ类LBD蛋 白家族成员。TtRa2 在幼穗中高丰度表达，而在根、茎、叶、种子中未检测到表达。融合的 TtRA2 主要以可溶性 形式存在，其表达量占总蛋白的 68.6%。重组 TtRA2 可与包含核心序列“GCGGCG”的 DNA 探针特异性结合，两者 形成的复合体的解离常数约为10 nmol·L-1 。【结论】TtRa2 参与圆锥小麦穗形态建成，其编码产物具备RA2-like 转录因子的典型特征，具有类似拟南芥LOB的DNA结合特性。 关键词：圆锥小麦；ramosa2；原核表达；LOB结构域；凝胶迁移阻滞分析 Cloning of Triticum turgidum L. ramosa2 and DNA Binding Activity Assay of the Recombinant Protein 1 １ 1,2 1,2 TANG Ru-chun , YANG Yu-heng , FAN San-hong , GUO Ai-guang 1 2 ( College of Life Sciences, Northwest Agriculture and Forestry University, Yangling 712100, Shaanxi; Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture, Yangling 712100, Shaanxi) Abstract ：【Objective 】 The ramosa2 gene (TtRa2) was cloned from tetraploid Tritium turgidum L., and the sequence features, tissue-specific expression pattern and in vitro act