第六章-微生物生长及其控制1.pptVIP

第六章 微生物生长及其控制 微生物生长的几个概念 第一节 微生物生长的测量 细胞数目（计繁殖数）的测定 细胞物质(biomass，生长量)的测定 一、细胞数目的测定 显微镜直接计数法 菌落计数法 比浊法 库尔特电子计数器计数法 流动式细胞光度计 显微镜直接计数法 菌落计数法（活菌计数法） 平板菌落计数法 载片培养计数法 微孔滤膜法 平板菌落计数法 细胞数目或干重与培养液浊度的关系 二、细胞物质的测定 重量法 细胞沉降体积法 细胞量的间接估计 重量法 一、微生物的个体生长和同步生长 个体生长——微生物个体细胞物质、结构组分和体积有规律地、不可逆地增加。 个体生长研究方法： 电子显微镜超薄切片 同步培养技术（synchronous culture）：设法使群体中的所有细胞尽量都处于同样的细胞生长和分裂周期中，然后分析此群体的各种生物化学特征，从而了解单个细胞所发生的变化。 同步生长（synchronous growth） 一、单细胞无分支微生物的典型生长曲线 典型的生长曲线 (2) 指数期（exponential phage） ，又叫对数期（logarithmic phase） 现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。 细胞特点： 酶系活跃，代谢旺盛； 细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最为均匀； 代时和倍增时间 影响微生物代时的因素 菌种 营养成分 营养物浓度 培养温度 一些细菌的代时 菌名 培养基 培养温度℃ 代时min E. coli（大肠杆菌） 肉汤 37 17 E. coli 牛奶 37 12.5 Enterobacter aerogenes（产气肠细菌） 肉汤或牛奶 37 16~18 E. aerogenes 组合 37 29~44 B. Cereus（蜡状芽孢杆菌） 肉汤 30 18 B. thermophilus（嗜热芽孢杆菌） 肉汤 55 18.3 Lactobacillus acidophilus（嗜酸乳杆菌） 牛奶 37 66~87 Streptococcus lactis（乳酸链球菌） 牛奶 37 26 S. lactis 乳糖肉汤 37 48 Salmonella typhi（伤寒沙门氏菌） 肉汤 37 23.5 Azotobacter chroococcum（褐球固氮菌） 葡萄糖 25 344~46 Mycobacterium tuberculosis（结核分枝杆菌）组合 37 792~93 Nitrobacter agilis（活跃硝化杆菌） 组合 27 1200 不同温度下的代时 温度对微生物的代时有明显影响： E. Coli 在不同温度下的代时 温度（℃） 代时（分） 温度（℃） 代时（分） 10 860 35 22 15 120 37 17 20 90 40 17.5 25 40 45 20 30 29 47.5 77 3.稳定期（stationary phase） ，又称：恒定期或最高生长期 （1）特点： 新生的细胞数目与死亡的细胞数目相等，总菌数达到最大值，活菌数保持恒定。 细胞转向衰老，生长不平衡。 代谢产物逐渐积累。 指导意义 发酵生产形成的重要时期（抗生素、氨基酸等），生产上应尽量延长此期，提高产量，措施如下： 补充营养物质（补料） 调pH 调整温度 指导收获：生产氨基酸、核苷酸或收获菌体时可在稳定期收获。 4. 死亡期 （decline phase） ， 又叫衰亡期 （1）特点： 细胞的死亡率将逐渐增加，群体中活的细胞数目急剧下降； 细胞内颗粒更明显，细胞出现多形态、畸形或衰退形，芽孢开始释放。 细胞裂解或自溶，释放出一些代谢产物。 4、 二次生长 三、连续培养（ Continuous culture ） 四、微生物的高密度培养 高密度培养（high cell-density culture,HCDC):微生物在液体培养时细胞群体超过常规培养10倍以上时的培养技术。 具体方法： 培养基的选择： 补料 提高溶解氧 防止有害代谢产物生成 第三节 环境对微生物生长的影响 一、 温度对微生物生长的影响 影响酶的活性 影响细胞膜的流动性 影响物质的溶解度 二、 pH 对微生物生长的影响 ①影响细胞膜所带的电荷从而影响膜的通透性和对营养物质的吸收和代谢产物的排出； ②改变培养基中化合物和重要的中间代谢产物的离子化状态，从而影响它们在培养基中的溶解性能和菌体对这些物质的利用； ③影响酶蛋白的解离度和电荷情况，改变酶蛋白的结构和功能，