酶分子化学修饰2.pptVIP

* * * * 酶蛋白的肽链被水解后，可能出现以下三种情况中的一种： 1 引起酶活性中心的破坏，酶失去催化功能。 2 仍维持活性中心的完整构象，保持酶活力。 3 有利于活性中心与底物结合并形成准确的催化部位，酶活力提高。 后两种情况，肽链的水解在限定的肽键上进行，称肽链有限水解。 应用实例： 1）提高酶活力： 2）消除抗原性： * （二）氨基酸置换修饰 将肽链上的某一个氨基酸换成另一个氨基酸，引起酶蛋白空间构象的改变，从而改变酶的某些特性和功能的方法。 通过两个途径实现： 化学修饰法：由于可用试剂的限制，获得的种类少。 蛋白质工程：利用基因操纵技术。 （三）金属离子置换修饰 改变酶分子中所含的金属离子，使酶的特性和功能发生改变的方法。 * 思考题： 酶化学修饰的种类有哪些? * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第四章 酶分子的修饰 * 第二节 酶化学修饰的种类及应用 一、酶的表面化学修饰 （一）大分子修饰（大分子结合修饰） 是目前应用最广的酶分子修饰方法。 1.定义：利用水溶性大分子与酶结合，使酶的空间结构发生某些精细的改变，从而改变酶的特性与功能的方法。 * 2. 修饰剂： 聚乙二醇（PEG）、右旋糖酐（dextran）、肝素（heparin）、蔗糖聚合物（Ficoll）等。 修饰方法：修饰前活化，然后在一定条件下与酶分子共价结合。 * 3. 应用： 如：PEG－超氧化物歧化酶（SOD） PEG－溶血类蛋白质（链激酶、尿激酶等） PEG－天门冬酰胺酶（ASNase） 消除了抗原性 延长了酶在体内的半衰期 又如：用Dextran 右旋糖酐 修饰?-淀粉酶，??－淀粉酶，胰蛋白酶、过氧化氢酶，提高了酶的热稳定性。 * （二）小分子修饰 （酶蛋白侧链基团修饰） 1 概念 定义：通过选择性的试剂或亲和标记试剂与酶分子侧链上特定的功能基团发生化学反应。 侧链基团：组成蛋白质氨基酸残基上的功能团。主要有：氨基、羧基、胍基、巯基、酚基、咪唑基。 侧链基团修饰剂：采用的各种小分子化合物。 20种不同氨基酸的侧链基团中只有极性氨基酸的侧链易被修饰，它们一般具有亲核性。 * 根据氨基酸侧链R基的极性，20种氨基酸可分成4类。 ① 非极性R基氨基酸（共8种）： 丙氨酸(Alanine,Ala,A), 亮氨酸(Leucine,Leu, L), 缬氨酸(Valine,Val,V)), 异亮氨酸(Isoleucine,Ile,I), 苯丙氨酸(Phenylalanine,Phe,F), 色氨酸(Tryptophan,Trp,W), 甲硫氨酸(Methionine,Met,M), 脯氨酸(Proline,Pro,P) * ② 无电荷的极性R基氨基酸（共7种）： 丝氨酸(Serine,Ser,S), 苏氨酸(Threonine,Thr,T), 酪氨酸(Tyrosine,Tyr,Y), 半胱氨酸(Cysteine,Cys,C), 天冬酰胺(Asparagine,Asn,N),甘氨酸(Glycine,Gly,G), 谷氨酰胺(Glutamine,Gln,Q) ③带正电荷的极性R基氨基酸（共3种）： 赖氨酸(Lysine,Lys,K), 精氨酸(Arginine,Arg,R), 组氨酸(Histidine,His,H) ④带负电荷的极性R基氨基酸（共2种）： 天冬氨酸(Aspartic acid,Asp,D), 谷氨酸(Glutamic acid,Glu,E) * 小分子修饰的几种重要反应： 烷基化反应 酰化反应 氧化还原反应 芳香环取代反应 * 2 修饰反应 1) 烷基化反应 试剂特点：烷基上带活泼卤素，导致酶分子的亲核基团（如－NH2，-SH等）发生烷基化。 可作用基团： 氨基（Lys赖，Arg精），巯基（Cys半光），羧基（Asp天冬、Glu谷），甲硫基（Met甲硫），咪唑基（His组）。 修饰剂：2，4－二硝基氟苯、碘乙酸、碘乙酰胺等。 * 烷基化反应 * 2) 酰基化反应 试剂特点：含有 结构，作用于侧链基团上的 亲核基团，使之酰基化。 可作用基团： 氨基，巯基，醇羟基（Ser丝、Thr苏），酚羟基（Tyr络） * 酰基化反应 * 3) 氧化还原反应 试剂特点：具有氧化或还原性。 氧化