扫描电镜样品制备的改进方法用于纤毛虫特氏前口虫皮层的观察 application of improved sample preparing methods of scanning electron microscopy(sem)to the observation of the cortical layer of frontonia tchibisovae.pdfVIP

第30卷第6期 电 子 显 微 学 报 V01．30．N0．6 201 ofChineseElectron 2011—12 1年12月 Journal Mitt‘oscopySociety 文章编号：1000—6281(2011)06-0574—03 扫描电镜样品制备的改进方法用于纤毛虫特氏前 口虫皮层的观察 丁文乔，陈 瑛，田佳玉，焦 迪，邱子健+ (哈尔滨师范大学生命科学与技术学院，黑龙江哈尔滨150025) 摘 要：人们观察纤毛虫或其他细胞表膜内表面结构的方法是利用透射电镜。但观察到的均为二维图像，展示其 形态结构的三维图像尚未有过报道。本文介绍了本实验室在扫描电镜样品制备的破膜方法基础上，在特氏前口虫 上的新改进。此改进的方法展示了应用于特氏前口虫后，所获得的表膜内表面皮层下三维立体结构观察的效果， 从而为相关领域的研究者应用扫描电镜探索纤毛虫细胞皮层下的形态及结构提供了新的方法： 关键词：特氏前口虫；扫描电镜；皮层；破膜方法 中图分类号：Q17；Q336文献标识码：A 原生动物纤毛虫是一类具有复杂胞器结构的 养皿中。实验时选取生长状态良好的个体。 1．1．2 单细胞真核生物。1。，特氏前口虫(Frontonia实验所需试剂及配制 techibisova)便为其中的一种。特氏前口虫活体为椭 90) 圆形，大小多变，约(130～250)¨m×(80～1 tzm，胞质透明，内含无数小颗粒，虫体前端或后端尤 丙酮／叔丁醇(1：1)混合溶液；(4)纯叔丁醇。 多。在身体一周密布着纺锤形的射出体’2。值得 1．2操作方法 注意的是：对于特氏前口虫的这些认识都是通过蛋 白银染色在光镜下观察得出或在透射电子显微镜 管吸取数只生长状态良好的虫体于干净无毒的载 下得到，这些图像均为二维。至今，它皮层下的形 玻片上。用滴管吸取刚配好的高锰酸钾溶液，迅速 态结构一直没有三维立体的直观显示。本实验室 将虫体冲到凹坑中。固定15rain；(3)用双蒸水洗 采用了一种用于扫描电镜样品制备的新方法，使观 净虫体，同时把细胞质洗净；(4)用饱和升汞液再固 测到细胞表膜下三维立体结构成为可能，但应用于 定5 像特氏前口虫这样体大的样品，则效果不太好。本 90％，95％的梯度丙酮脱水，每级梯度处理5min，之 文对此方法做了改进，获得满意效果，为特氏前口 后用100％丙酮脱水两次每次10min；(6)用丙酮／ 0 虫或其它细胞的表膜下结构研究提供有效方法。 叔丁醇(1：1)混合溶液处理1rain；(7)在纯叔丁 醇巾处理彻底置换出丙酮；(8)临界点干燥，借助体 1材料和方法 视显微镜将干燥后的样品转到铜台卜-，再置于离子 1．1 材料 溅射仪中，抽真空20min，喷金10rain；(9)在扫描 1．1．1特氏前口虫的培养 电镜下观察。 (1)材料来源：特氏前口虫为2010年5月采白 2 结果 哈尔滨市松北区一洼地内，经纯系培养而得。(2) 培养方法：从水样中分离出单个虫体，放入含有小 2．1整体观察 麦粒浸出液的培养皿内，并向其中加入一些绿藻。 样品呈现