体外抗体形成细胞的检测—定量溶血分光光度计法Quantitative.PPTVIP

体外抗体形成细胞的检测—定量溶血分光光度计法(QHS)(Quantitative Hemolytic Spectrophotometric determination) 原 理 用绵羊红细胞（SRBC）免疫小鼠，然后将免疫活性细胞（小鼠脾脏B淋巴细胞）、SRBC和补体在液相介质中进行反应。SRBC与抗体形成细胞所产生的IgM结合形成抗原抗体复合物，激活补体系统，裂解SRBC而释放出血红蛋白，以分光光度计定量测定。所测值反映了抗体形成细胞产生抗体的功能。 实 验 步 骤 SRBC及其制备 脱纤维防凝处理的SRBC，以NS洗涤二次，每次2000rpm 离心5min。弃上清，制成SRBC悬液，然后用血细胞计数板计数细胞，最后稀释成1.5×108 sRBC/ml。 补体 新鲜豚鼠血清，用前经SRBC吸收后，用RPMI1640稀释。 （方法在新鲜的豚鼠血清中加入经洗涤3次的压积SRBC，按血清与SRBC体积比为5:1加入。4℃吸收30min后，3000rpm离心15min，吸出的上清即为RBC吸收的豚鼠血清。临用前1：10稀释。） 免疫小鼠脾细胞的制备 1）免疫鼠制备：取上述稀释的SRBC，经尾静脉或腹腔内注射免疫小鼠?（鼠龄8～10周），每只0.2ml。 2）取脾脏：72小时拉颈处死，取出脾脏用含5%小牛血清的Hanks液清洗，去除脂肪和结缔组织。 3）收取脾细胞