2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素a对人肺腺癌细胞株a-549生物学行为的影响.docVIP

5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响 董必文，段凤英，段训凰（330006江西 南昌，南昌大学第二附属医院呼吸内科） [摘要] 目的：探讨DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-dC）联合组蛋白去乙酰化抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响。方法：人肺腺癌细胞株A549细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养液培养。实验分4组，对照组：DMEM培养液中加入等量的二甲基亚砜( DMSO)； 5-aza-dC组：细胞接种20 h后，加入5μmol/L的5-aza-dC； TSA组：细胞接种20 h后，加入300 nmol/L TSA； 5-aza-dC+TSA组：细胞接种20 h后，加入5μmol/L的5-aza-dC，24 h后再加入300 nmol/L TSA。MTT比色法测定各处理因素对A549细胞生长的影响； Annexin V/PI双染法测定各组细胞培养72 h后的凋亡情况；应用RT-PCR检测各组细胞培养72 h后细胞CCAAT增强子启动蛋白α（C/EBPα） mRNA的表达。结果： （1）5-aza-dC及TSA呈时间依赖性地抑制A549细胞的生长，而在同一时间不同组别比较联合用药组细胞生长抑制率较单用药组明显增加，差别均有统计学意义（P 0.05）；（2）5-aza-dC和TSA能够诱导A549细胞凋亡，且联合用药组A549细胞凋亡率明显高于单用药组，差别均有统计学意义（P 0.05）；（3）5-aza-dC和TSA能够上调C/EBPα 基因mRNA的表达，联合用药组中C/EBPα 基因mRNA表达量（0.581±0.024）高于5-aza-dC组（0.402±0.016）（P 0.05） 和TSA组（0.394±0.031）（P 0.05），差别有统计学意义；（4）5-aza-dC组与TSA组在抑制A549细胞生长、诱导细胞凋亡、增强C/EBPα 基因mRNA的表达方面比较，差别均无统计学意义。结论 ：与单用5-aza-dC或TSA相比，联合应用两种药物能够更好的抑制人肺腺癌A549细胞的增殖、诱导细胞凋亡和增强C/EBPα 基因mRNA的表达，为去甲基化多药联合治疗肿瘤提供了理论依据。 [关键词] 肺肿瘤；曲古抑菌素A；5-氮-2＇-脱氧胞苷；C/EBPα；甲基化； A549细胞 [中图法分类号] R73-36 [文献标志码]A Effects of 5-aza-2-deoxycytidine and trichostatinA on proliferation and apoptosis of lung epithelial carcinoma A549 cells Dong Biwen,Duan Feng-yin,Duan Xun-huang (Department of Respiratory Medicine，theSecond Hospital affiliated to Medical College of Nanchang University,Nanchang 330006,China[Abstract] Objective:To explore the effects of methyltransferase inhibitor 5-aza-2-deoxycytidine（5-aza-dC） and histone deacetylase inhibitor trichostatin A (TSA) on proliferation and Apoptosis of lung epithelial carcinoma A549 cells. Methods: Human epithelial carcinoma A549 cells were cultured in DMEM culture medium containing 10% Fetal bovine serum. The trial consisted of four groups:(1) control group:Add the same amount of Dimethyl sulfoxide（DMSO）into DMEM culture medium?; (2) 5-aza-dC group: 20 h after inoculation, A549 cells were treated with 5μmol/L 5-aza-dC (3) TSA group: 20 h after inoculation, A549 cells were treated with 300nmo