维药材刺山柑中总黄酮提取分离和治疗类风湿关节炎药效学研究.doc

分类号： R96 学校代码： 10758 密 级： 公 开 学 号：硕士学位论文 维药材刺山柑中总黄酮的提取分离及治疗类风湿关节炎的药效学研究 Study on Pharmacology of Rheumatoid Arthritis and Situation of Extraction and Separation of Total Flavonoid in Capparis spinosa L., an Uyghur Traditional Herbal 研究生姓名 曹锐 导师姓名及职称 王颖 教授 合作导师姓名及职称 石庆华 副教授 学位门类级别 理学硕士 专业名称 生物化学与分子生物学 研究方向 生化药学 所在学院 农学院 新疆·乌鲁木齐 二○一○年六月 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名： 时间： 年 月 日 关于学位论文使用授权的说明 本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业大学将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名： 时间： 年 月 日 导师签名： 时间： 年 月 日 维药材刺山柑中总黄酮的提取分离及治疗类风湿关节炎的药效学研究 摘 要 目的：探讨刺山柑总黄酮的醇溶超声提取、大孔吸附树脂分离的最佳条件，及其抗炎、镇痛、调节免疫以及对大鼠佐剂性关节炎的干预作用。 方法：以新疆吐鲁番野生刺山柑果实为原料，正交设计优化醇溶超声方法提取刺山柑中总黄酮，选择最佳提取条件；利用静、动态吸附-洗脱试验筛选出分离效果较好的大孔吸附树脂对刺山柑中总黄酮成分进行纯化；建立醋酸致小鼠扭体、电热板致痛、二甲苯致小鼠耳廓肿胀以及蛋清致小鼠足趾肿胀四种实验模型，对刺山柑总黄酮抗炎镇痛效果进行初步研究；利用环磷酰胺对小鼠皮下多点注射制造免疫低下模型，与阳性药左旋咪唑对比，考察刺山柑中总黄酮对正常以及免疫低下小鼠的免疫调节作用；通过对大鼠右后足趾皮下注射弗式完全佐剂制造大鼠佐剂性关节炎模型，于给药21天时以大鼠足趾肿胀趋势、关节病变及滑膜病理变化的组织切片观察、局部炎症中炎症因子含量、血清中细胞因子含量、血液常规检测及血液沉降率、类风湿因子等生理生化指标的变化，对刺山柑总黄酮治疗类风湿性关节炎疾病的药效学进行研究。 结果：正交实验筛选出在室温条件下，以浓度为70%的乙醇、超声60min、料液比为1：20时提取刺山柑总黄酮效果最佳；动、静态吸附-洗脱实验筛选出H103型大孔树脂的分离纯化效果最优，通过芦丁标准品回归方程测得总黄酮含量为63.98%，其供试药总黄酮含量为15.45mg/ml。在小鼠抗炎镇痛试验中，刺山柑中总黄酮能够有效减少醋酸所致小鼠扭体的次数，延长热板致小鼠痛阈反应时间，缓解二甲苯致小鼠耳廓肿胀及蛋清致小鼠足趾肿胀。对于正常小鼠和免疫低下小鼠，刺山柑中总黄酮均能有效增加免疫器官的脏器系数、增强巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、提高脾细胞增殖活性，达到提高免疫力的作用。在大鼠佐剂性关节炎试验中，其能够有效缓解组织炎症引起的肿胀、保护滑膜组织，降低炎性细胞浸润；在血液生化指标检测中，刺山柑中总黄酮可降低炎症介质和细胞因子IL-6、TNF-α含量，减少白细胞聚集，防止血液沉降速率的加快，达到治疗类风湿性关节炎的目的，其治疗效果随剂量的升高呈现一定的量效关系。 结论：通过对小鼠抗炎镇痛和免疫学实验研究表明，刺山柑中总黄酮能够有效减缓炎症反应，降低疼痛发热症状，增强机体免疫力；对于大鼠佐剂性关节炎实验中，刺山柑中总黄酮能降低局部炎症，保护关节滑膜组织，干预花生四烯酸途径以及淋巴循环，间接导致体内炎症介质和细胞因子降低至正常水平，从而可能起到治疗类风湿性关节炎疾病的作用。 关键词：刺山柑；黄酮；大鼠；佐剂性关节炎 Study on Pharmacology of Rheumatoid Arthritis and Situation of Extraction and