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仪器分析实验 毛细管电泳仪分离测定雪碧中 的苯甲酸钠 2015 年 5 月 5 日 毛细管电泳仪分离测定雪碧中的苯甲酸钠 开课实验室：环境资源楼310 【实验目的】 1、了解毛细管电泳分离的基本原理； 2 、了解毛细管电泳仪（以安捷伦 7100 为例）的结构及基本操作； 3、掌握毛细管电泳的基本定性、外标法、标准曲线定量方法。 【基本原理】 • 原理概述：本实验通过使用毛细管电泳法，通过外标法绘制工作曲线，对饮料中苯甲酸钠含量进行定性定量 测量，得出饮料中苯甲酸钠的含量。 • 电泳： 定义：带电粒子在电场作用下在缓冲溶液中作定向运动的现象； 分类：自由电泳、区带电泳（将样品加于载体上，并加一个电场，在电场作用下，得到良好的分离）。 • 电渗：液体相对于带电的管壁移动的现象。由于毛细管材料通常为熔融硅胶，其中的硅醇基团，是构成氢键 吸附并使毛细管内电介质产生电渗流的重要原因。在常用缓冲液pH值下，毛细管壁带负电，于是在贴近管 壁的液体表面形成了一个和管壁电荷异号的偶电层。在毛细管电泳中，电渗是指高电场作用下，偶电层中水 和阳离子或质子引起流体朝负极方向运动。电渗是毛细管电泳中最重要和最有趣的性质之一。 • 粒子的运动速度：由于同时存在着泳流和渗流，粒子在毛细管电介质中的运动速度应当是这两种速度的矢量 和，其迁移速率是电泳和电渗力的函数： 正离子：运动方向和电渗一致，应当最先流出； 中性离子：泳流速度为0，将随电渗而行； 负离子：因其运动方向和电渗相反，在电渗速度大于电泳速度时，它将在中性离子之后流出； 图1 不同粒子在毛细管电介质中的运动 • 毛细管电泳： 特点：它的电泳过程在散热效率极高的毛细管内进行，故能够引入高的电场强度，从而全面改善分离质量。 优点：使用细柱子，一是减小电流，因此减少自热；二是增大散热面积（侧面积与截面积之比），加快散热； 缺点：进样和检测等技术方面的麻烦与困难； 检测：电泳毛细管的直径极小，产生的溶质谱带体积也极小。通常采用的检测方法是电泳的柱上检测。此时 峰宽对迁移时间将有一定的依赖性。移动较快的组分通过检测窗所需的时间较短，反之则较长。毛 细管电泳的紫外检测属柱上检测，检测点靠近管子的末端。毛细管的外壁通常有一层几微米的聚酰 亚胺涂层。使用时需要将一小段管子（小于1cm）的聚酰亚胺涂层去掉，以形成观察池。 • 苯甲酸钠：苯甲酸的钠盐，无味或略带安息香气味，在空气中稳定，易溶于水，由于比苯甲酸更易溶于水， 比苯甲酸更常用与工业生产。但有研究显示，苯甲酸类具有叠加毒性作用，普遍已改用山梨酸盐作为防腐剂。 1 仪器分析实验 毛细管电泳仪分离测定雪碧中 的苯甲酸钠 2015 年 5 月 5 日 【仪器与试剂】 1、仪器： Agilent 71000 型液相色谱仪； 图2 毛细管电泳仪器简图 2 、试剂： 1.0 mol/L NaOH 溶液；20 mmol/L PH=9.3 硼酸钠溶液；雪碧滤液滤液（脱气后经 0.45µm 滤膜过滤）。 苯甲酸钠分析纯试剂；碳酸氢钠溶液。 【实验步骤】 1、样品制备： 将雪碧倒入烧杯后放在超声波仪中超声脱气，去除饮料中溶解的空气以及 CO2 气体。脱气后的雪碧溶液通 过 0.45µm 的滤膜过滤后，转移至进样瓶中备用。称量 0.2g 的苯甲酸钠，用 20 g/L 的NaHCO₃溶液加热溶 解于 10ml 的容量瓶中，再从中移取2.5mL 溶液至 50ml 容量管中定容作为母液。再分别从母液中移取 2mL 、 4mL 、6mL、8mL、10mL 溶液至 25mL 容量瓶中定容。 2 、仪器的前期准备： 打开计算机，等计算机启动完毕后，打开毛细管电泳仪电源开关。通讯完毕后，分别在进样盘中放入相应 的溶液：1-NaOH 溶液；2-纯水；3-纯水；4 、5、6-硼酸钠缓冲液；7-空；8-废液。11-15 为苯甲酸钠的标准 溶液；17 为待测的雪碧 （18 为芬达，未